本試劑盒僅供科研使用
 胃蛋白酶（Pepsin）試劑盒說明書 (貨號(hào)：WS0121F 分光法 24 樣)
一、產(chǎn)品簡(jiǎn)介： 胃蛋白酶（Pepsin）是一種消化性蛋白酶，由胃粘膜主細(xì)胞分泌，分解食物中蛋白質(zhì) 成小肽段。一般用于神經(jīng)性低酸癥的鑒別，慢性胃炎、慢性胃擴(kuò)張、慢性十二指腸炎等癥 狀時(shí)也會(huì)引起胃蛋白酶分泌的減少。 胃蛋白酶可催化血紅蛋白水解生成含酚的氨基酸，含酚的氨基酸與福林酚反應(yīng)后顯藍(lán) 色；其顏色的深淺與胃蛋白酶活性呈正比。
二、試劑盒組分與配制： 試劑名稱 規(guī)格 保存條件 備注 提取液 液體 30mL×1 瓶 4℃保存 試劑一 液體 5mL×1 瓶 4℃保存 試劑二 粉體 mg×2 瓶 4℃保存 臨用前甩幾下使粉體落入底部，每瓶 再加 13mL 蒸餾水溶解備用。 試劑三 液體 30mL×1 瓶 4℃保存 試劑四 液體 6mL×1 瓶 4℃保存 標(biāo)準(zhǔn)品 粉體 mg×1 支 4℃保存 臨用前加 2mL 提取液，再用蒸餾水 稀釋10倍，即為0.05mg/mL 酪氨酸。
三、所需的儀器和用品： 可見分光光度計(jì)、1mL 玻璃比色皿（光徑 1cm）、臺(tái)式離心機(jī)、可調(diào)式移液器、天平、 研缽、冰和蒸餾水。
四、胃蛋白酶活性測(cè)定： 建議正式實(shí)驗(yàn)前選取 2 個(gè)樣本做預(yù)測(cè)定，了解本批樣品情況，熟悉實(shí)驗(yàn)流程，避免實(shí)驗(yàn) 樣本和試劑浪費(fèi)！ 1、樣本制備： ① 組織樣本： 取約 0.1g 組織，加入 1mL 提取液，進(jìn)行冰浴勻漿。4℃×3500rpm 離心 5min，取 上清，置冰上待測(cè)。 【注】：若增加樣本量，可按照組織質(zhì)量（g）：提取液體積(mL)為 1：5~10 的比例進(jìn)行提取 ② 液體樣本：液體用提取液按照 1:1 的比例混合稀釋后，4℃×3500rpm，離心 5min， 取上清液檢測(cè)。 2、上機(jī)檢測(cè)： ① 可見分光光度計(jì)預(yù)熱 30min 以上，調(diào)節(jié)波長(zhǎng)至 680nm，蒸餾水調(diào)零。 ② 所有試劑解凍至室溫。 ③ 在 EP 管中依次加入： 試劑名稱（μL） 測(cè)定管 對(duì)照管本試劑盒僅供科研使用 2 樣本 100 100 試劑一 100 37℃孵育 5min 試劑二 500 500 37℃孵育 10min 試劑一 100 37℃孵育 5min 后，3000rpm 離心 5min，上清液待測(cè)。 ④ 顯色反應(yīng)，在 EP 管中： 試劑名稱（μL） 測(cè)定管 對(duì)照管 標(biāo)準(zhǔn)管 （僅做一次） 空白管 （僅做一次） 上清液 120 120 標(biāo)準(zhǔn)品 120 提取液 120 試劑三 600 600 600 600 試劑四 120 120 120 120 37℃孵育 20min 后（若渾濁則室溫 3000rpm 離心 5min），全部澄清反應(yīng)液 至 1mL 比色皿中，于 680nm 處測(cè)定，讀取各管的吸光值 A。ΔA=A 測(cè)定 -A 對(duì)照（每個(gè)樣本做一個(gè)自身對(duì)照）。 【注】1. 若ΔA 在零附近徘徊，可以延長(zhǎng)反應(yīng)時(shí)間 T（如 37℃孵育 10min 延長(zhǎng)至 20min）或增加樣本 量 V1（如增至 150μL，則試劑二相應(yīng)減少），則改變后的反應(yīng)時(shí)間 T 和樣本量 V1 需代入計(jì) 算公式重新計(jì)算。 2. 若 A 測(cè)定值大于 2，可以減少樣本量 V1（如減至 50μL，用提取液相應(yīng)補(bǔ)充），則改變后的 樣本量 V1 需代入計(jì)算公式重新計(jì)算。 五、結(jié)果計(jì)算： 1、按樣本蛋白濃度計(jì)算： 酶活定義：37℃每毫克蛋白每分鐘催化血紅蛋白水解生成 1μg 酪氨酸為 1 個(gè)酶活單位(U)。 胃蛋白酶（U/mg prot）=[ΔA÷（A 標(biāo)準(zhǔn)-A 空白）×C 標(biāo)準(zhǔn)×V2]÷ (V1×Cpr) ÷T =35×ΔA÷（A 標(biāo)準(zhǔn)-A 空白）÷Cpr 2、按樣本鮮重計(jì)算： 酶活定義：37℃每 g 組織每分鐘催化血紅蛋白水解生成 1μg 酪氨酸為 1 個(gè)酶活單位(U)。 胃蛋白酶（U/g 鮮重）=[ΔA÷（A 標(biāo)準(zhǔn)-A 空白）×C 標(biāo)準(zhǔn)×V2]÷(W×V1÷V) ÷T =35×ΔA÷（A 標(biāo)準(zhǔn)-A 空白）÷W 3、液體 LAP 活力的計(jì)算: 酶活定義：37℃每毫升液體每分鐘催化血紅蛋白水解生成1μg酪氨酸為1個(gè)酶活單位(U)。 胃蛋白酶（U/mL）=[ΔA÷（A 標(biāo)準(zhǔn)-A 空白）×C 標(biāo)準(zhǔn)×V2]÷V1×2÷T =70×ΔA÷（A 標(biāo)準(zhǔn)-A 空白） V---加入提取液體積，1 mL； V1---加入樣本體積，0.1mL； V2---第③歩反應(yīng)總體積，0.7mL； T---反應(yīng)時(shí)間，10min； C 標(biāo)準(zhǔn)---50μg/mL； W---樣本質(zhì)量，g； Cpr---樣本蛋白質(zhì)濃度，mg/mL；建議使用本公司的 BCA 蛋白含量檢測(cè)試劑盒；