手機(jī)版
化工儀器網(wǎng)手機(jī)版
化工儀器網(wǎng)小程序
官方微信
公眾號(hào)：chem17
掃碼關(guān)注視頻號(hào)
轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子α（TGF-α）的測(cè)定
轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子α（transforming growth factor-α，TGF-α）的結(jié)構(gòu)和功能與TGF相似，屬EGF家族。檢測(cè)EGF生物學(xué)活性的方法也可以檢測(cè)TGF-α的活性。此外，EGF能誘導(dǎo)3T3小鼠的J2細(xì)胞合成DNA，TGF-α與EGF競(jìng)爭(zhēng)受體，抑制EGF的作用，故可通過(guò)抑制EGF誘導(dǎo)的DNA合成試驗(yàn)檢測(cè)TGF-α的活性。
1．將3T3J2細(xì)胞培養(yǎng)在含0．5％FCS的DMEM培養(yǎng)液中，用0．25％胰蛋白酶消化細(xì)胞，用細(xì)胞培養(yǎng)液洗滌細(xì)胞2次，并配成6×104／mL。
2．于24孔培養(yǎng)板每孔加入0．5mL細(xì)胞懸液，用細(xì)胞培養(yǎng)液作系列稀釋的TGF-a待測(cè)樣品或標(biāo)準(zhǔn)晶0．5mL、1nmol／LEGF和luCi（37kBp）3H-TdR，并設(shè)置單加EGF的陽(yáng)性對(duì)照和高劑量TGF-a陰性對(duì)照，均設(shè)3復(fù)孔，總反應(yīng)體積為lmL。
3．置37~C 5％C02溫箱中培養(yǎng)72h。用PBS洗3次，每孔加入5％三氯醋酸lmL沉淀DNA，再用甲醇洗孔1次，離心去甲醇溶液。加入lmLlmol／LNaOH，溶解細(xì)胞。將各孔細(xì)胞吸人閃爍液瓶中，在p-計(jì)數(shù)儀上測(cè)定各孔的cpm。根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)計(jì)算待測(cè)樣品中的TGF-a含量（活性）。
相關(guān)產(chǎn)品
免責(zé)聲明
- 凡本網(wǎng)注明“來(lái)源：化工儀器網(wǎng)”的所有作品，均為浙江興旺寶明通網(wǎng)絡(luò)有限公司-化工儀器網(wǎng)合法擁有版權(quán)或有權(quán)使用的作品，未經(jīng)本網(wǎng)授權(quán)不得轉(zhuǎn)載、摘編或利用其它方式使用上述作品。已經(jīng)本網(wǎng)授權(quán)使用作品的，應(yīng)在授權(quán)范圍內(nèi)使用，并注明“來(lái)源：化工儀器網(wǎng)”。違反上述聲明者，本網(wǎng)將追究其相關(guān)法律責(zé)任。
- 本網(wǎng)轉(zhuǎn)載并注明自其他來(lái)源（非化工儀器網(wǎng)）的作品，目的在于傳遞更多信息，并不代表本網(wǎng)贊同其觀(guān)點(diǎn)和對(duì)其真實(shí)性負(fù)責(zé)，不承擔(dān)此類(lèi)作品侵權(quán)行為的直接責(zé)任及連帶責(zé)任。其他媒體、網(wǎng)站或個(gè)人從本網(wǎng)轉(zhuǎn)載時(shí)，必須保留本網(wǎng)注明的作品第一來(lái)源，并自負(fù)版權(quán)等法律責(zé)任。
- 如涉及作品內(nèi)容、版權(quán)等問(wèn)題，請(qǐng)?jiān)谧髌钒l(fā)表之日起一周內(nèi)與本網(wǎng)聯(lián)系，否則視為放棄相關(guān)權(quán)利。
采購(gòu)中心