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表皮生長(zhǎng)因子(EGF)的測(cè)定方法

來(lái)源:上海源葉生物科技有限公司   2011年12月17日 11:30  

  EGF主要來(lái)源于頒下腺。成年人許多組織中也表達(dá)EGF。人成纖維細(xì)胞、唾液腺癌細(xì)胞等也可產(chǎn)生EGF。EGF的作用沒(méi)有種屬特異性,人和小鼠的EGF對(duì)人成纖維細(xì)胞的作用相同。

 
    1.Swiss 3T3細(xì)胞增殖法
    (1)用含5%FCS的DMEM培養(yǎng)液將Swiss 3T3細(xì)胞調(diào)整成1×104/mL,接種于60mm的培養(yǎng)皿中(5mL),置37C 5%C02溫箱中培養(yǎng)4~5d,待細(xì)胞匯合后,更換上述培養(yǎng)液,繼續(xù)培養(yǎng)2~3d,此時(shí)細(xì)胞數(shù)不再增多。
    (2)分別加入200ral系列稀釋的待測(cè)樣品或標(biāo)準(zhǔn)品,陰性對(duì)照加培養(yǎng)液,繼續(xù)培養(yǎng)4d。
    (3)采用3H-TdR摻人法或比色法測(cè)定細(xì)胞增殖反應(yīng)。根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算待測(cè)樣品中EGF的含量(活性),或用誘導(dǎo)50%zui大細(xì)胞增殖的zui高稀釋度表達(dá)EGF的含量。
 
    2.BALB/c 3T3細(xì)胞增殖法
    (1)用含5%FCS的DMEM培養(yǎng)液將Swiss 3T3細(xì)胞調(diào)整成2×104/mL,接種于60mm的培養(yǎng)皿中(5mI),置37C 5%C02溫箱中培養(yǎng)5ho更換同樣培養(yǎng)液,繼續(xù)培養(yǎng)24h。
    (2)向培養(yǎng)物中加入100~L系列稀釋的待測(cè)樣品或標(biāo)準(zhǔn)品,陰性對(duì)照培養(yǎng)皿加培養(yǎng)液,培養(yǎng)16h后,同上法測(cè)定和計(jì)算EGF的含量(活性)。

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