生物制品是指以微生物、細(xì)胞、動(dòng)物或人源組織和體液等為起始原材料，用生物學(xué)技術(shù)制備，用于預(yù)防、治療和診斷人類疾病的制劑。當(dāng)前，隨著越來越多的生物制品進(jìn)入治療領(lǐng)域，于是生物制品與之俱來的生物安全性問題被漸漸提上日程，生物制品的質(zhì)量控制也日趨嚴(yán)格。其中宿主細(xì)胞殘留核酸由于可能會傳遞腫瘤或病毒相關(guān)基因，存在潛在致癌性和感染性風(fēng)險(xiǎn)。各國藥品監(jiān)督管理機(jī)構(gòu)對生物制品中宿主細(xì)胞殘留核酸的態(tài)度謹(jǐn)慎且明確，要求各制藥企業(yè)建立詳細(xì)可行、靈敏度高的檢測方法，用于驗(yàn)證藥品的純化過程可以去除殘留DNA，并對終產(chǎn)品的放行嚴(yán)格把關(guān)，避免攜帶外源DNA的藥品流入市場。

宿主細(xì)胞殘留DNA標(biāo)準(zhǔn)

各國藥品監(jiān)督管理機(jī)構(gòu)均對生物制品中宿主細(xì)胞DNA的殘留量進(jìn)行了嚴(yán)格的限度控制以規(guī)避風(fēng)險(xiǎn)。

表1 宿主細(xì)胞殘留DNA標(biāo)準(zhǔn)

除了對宿主核酸殘留量有限度規(guī)定，我國shou次對于DNA殘留片段的大小也有了明文規(guī)定：2022年，我國國家藥品監(jiān)督管理局藥品審評中心發(fā)布的《體內(nèi)基因治療產(chǎn)品藥學(xué)研究與評價(jià)技術(shù)指導(dǎo)原則（試行）》中提到對于生產(chǎn)若使用了腫瘤細(xì)胞系致瘤細(xì)胞系或攜帶有致瘤基因、病毒來源序列的細(xì)胞（如HEK 293T細(xì)胞），在確保無完整活細(xì)胞殘留的同時(shí)，需對DNA的殘留量和殘留片段大小進(jìn)行控制。建議盡量將殘留DNA控制在10ng/劑以內(nèi)，DNA殘留片段的大小控制在200bp以下。

表2宿主細(xì)胞殘留DNA片段風(fēng)險(xiǎn)因子

注：片段越長，風(fēng)險(xiǎn)因子越大。

宿主細(xì)胞殘留DNA檢測方法

為確保生物制品的安全性和質(zhì)量，因此建立合適的宿主細(xì)胞殘留DNA檢測方法至關(guān)重要?！吨袊幍?020年版》通則3407中推薦了三種外源性DNA殘留量測定方法，包括DNA探針雜交法、熒光染色法和定量PCR法。

表3 宿主細(xì)胞殘留DNA檢測方法

其中定量PCR法因其檢測特異性高、靈敏度高、重現(xiàn)性好、通量高、耗時(shí)短等優(yōu)點(diǎn)現(xiàn)已成為生物制品工藝研究和產(chǎn)品質(zhì)量控制的shou選檢測方法。愛必信最終選擇更準(zhǔn)確、可靠、科學(xué)的熒光探針（TaqMan®）qPCR 法作為細(xì)胞殘留DNA檢測的方法。推出了一系列宿主細(xì)胞殘留核酸定量檢測試劑盒，能夠?qū)Ｒ豢焖俚膶χ锌貥悠坊蛟撼善分兴拗骷?xì)胞殘留核酸進(jìn)行準(zhǔn)確定量，靈敏、準(zhǔn)確和定量下限，能滿足病毒疫苗生產(chǎn)、重組蛋白藥物純化、細(xì)胞治療和疫苗研究中緩解PBMC細(xì)胞結(jié)團(tuán)以及慢病毒的大規(guī)模純化等工業(yè)客戶的工藝研究和質(zhì)控需求。

圖1 熒光探針（TaqMan®）qPCR法

宿主細(xì)胞殘留DNA檢測流程

宿主細(xì)胞殘留DNA檢測流程主要包含宿主細(xì)胞殘留DNA提取（磁珠法）和宿主細(xì)胞殘留DNA定量檢測（熒光探針（TaqMan®）qPCR法）。

圖2 宿主細(xì)胞殘留DNA檢測流程

宿主細(xì)胞殘留核酸提取

宿主細(xì)胞殘留DNA（磁珠法）樣本前處理試劑盒（abs60544）用于生物制品樣本前處理，精準(zhǔn)抽提各種生物制品中宿主細(xì)胞殘留DNA。搭配宿主殘留DNA/DNA片段檢測試劑盒使用。

產(chǎn)品優(yōu)勢：

適用于E.coli、HEK293、Vero、CHO等多種宿主DNA樣本

靈敏度高

通用性強(qiáng)

靈敏度可達(dá)0.03pg/uL，回收率可達(dá)70-130%，符合國家藥典標(biāo)準(zhǔn)

可手動(dòng)提取、可配合全自動(dòng)核酸提取儀自動(dòng)化提取，滿足高通量

適用性強(qiáng)

操作便捷

消化時(shí)間僅15min，配合核酸提取儀1h內(nèi)完成整個(gè)提取過程

產(chǎn)品信息

宿主細(xì)胞殘留核酸/DNA片段檢測

產(chǎn)品優(yōu)勢：

快速便捷：方便操作，1小時(shí)出結(jié)果。

穩(wěn)定性高：受環(huán)境影響較小，保質(zhì)期內(nèi)性能穩(wěn)定

精密度高：各濃度檢測值CV<15%

專一性強(qiáng)：考察生物制品生產(chǎn)中常用的DNA對檢測試劑盒的干擾，干擾組應(yīng)與對照組重合，未見干擾。

產(chǎn)品信息：

參考文獻(xiàn)：

[1]  State Administration for Market Regulation. Administrative measures for the batch release of biological products[S].2020-12-11

[2]《體內(nèi)基因治療產(chǎn)品藥學(xué)研究與評價(jià)技術(shù)指導(dǎo)原則（試行）》，國家藥品監(jiān)督管理局藥品審評中心，2022年5月