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蛋白質印跡是研究實驗室普遍使用的一種技術，用于研究感興趣的蛋白質。蛋白質印跡用于抗體驗證、蛋白質-蛋白質相互作用研究以及許多其他應用。1然而，生成可解釋的蛋白質印跡結果可能具有挑戰(zhàn)性。以下是一些常見問題以及解決方法。
高背景
| 可能是由于 | 嘗試這個 |
|---|---|
| 高抗體濃度 | 使用一抗和二抗進行滴定。包括已知的蛋白質對照。 |
| 封閉液 | 使用新鮮的封閉液，增加封閉時間/溫度，嘗試不同的封閉劑。 |
| 印跡在封閉/洗滌過程中干燥 | 確保膜在封閉和清洗步驟中被充分覆蓋。 |
| 洗得不夠 | 增加洗滌次數(shù)和洗滌液體積。確保至少洗滌 3 次，每次 5 分鐘。 |
| 膠片曝光過度 | 嘗試較短的曝光時間。 |
沒信號
| 可能是由于 | 嘗試這個 |
|---|---|
| 抗體濃度太低 | 使用一抗和二抗進行滴定。包括已知的蛋白質對照。 |
| 樣品中目標含量低 | 增加凝膠上的蛋白質濃度。建議滴定。 |
| 一抗和二抗不匹配 | 確保二抗針對一抗的宿主物種。 |
| 轉移問題 | 使用帶有顏色的蛋白質標記來檢查轉移。使用對照蛋白優(yōu)化轉移。轉移前檢查是否有氣泡。 |
| 洗次數(shù)太多 | 減少洗滌次數(shù)。 |
多頻段
| 可能是由于 | 嘗試這個 |
|---|---|
| 凝膠超載 | 滴定加載在凝膠上的蛋白質樣品。 |
| 使用過多抗體 | 使用一抗和二抗進行滴定。包括已知的蛋白質對照。 |
| 膠片曝光過度 | 嘗試較短的曝光時間。 |
| 阻塞問題 | 使用新鮮的封閉液，增加封閉時間/溫度，嘗試不同的封閉劑。 |
| 目標蛋白的翻譯后修飾 | 研究發(fā)表了目標蛋白翻譯后修飾的例子，可以提供生物學解釋（即磷酸化、糖基化、核糖基化）。 |
| 翻譯后裂解 | 許多蛋白質被合成為前蛋白質，然后被切割成活性形式，例如前半胱天冬酶。研究針對您的目標發(fā)布的示例。 |
| 拼接變體 | 選擇性剪接可能會產(chǎn)生由同一基因產(chǎn)生的不同大小的蛋白質。研究針對您的目標發(fā)布的示例。 |
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