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重組胰蛋白酶攜手羧肽酶B、雙堿性內(nèi)切酶助力重組胰島素生產(chǎn)

來源:翌圣生物科技(上海)股份有限公司   2024年01月04日 17:50  

 


生物酶是在生物體內(nèi)發(fā)揮催化作用的生物分子,能促使生化反應(yīng)更迅速進(jìn)行,而自身不被消耗或改變。因其?效專?、反應(yīng)條件溫和、對環(huán)境友好等優(yōu)勢,在生物醫(yī)藥、體外診斷、合成生物、綠色生物催化、醫(yī)美、食品、能源等領(lǐng)域廣泛應(yīng)用。

 

隨著人們對生物酶應(yīng)用研究的深入和拓展,對酶的種類和性能提出了更高的要求。然而,自然界或市售的生物酶有時(shí)難以滿足研究需求,酶應(yīng)用研究領(lǐng)域面臨著“無酶可用”、酶性能“不足”等問題亟待解決。

 

小翌為大家準(zhǔn)備好了性價(jià)比的幾款無動物源性蛋白酶,為胰島素生產(chǎn)等生物制藥領(lǐng)域提供助力:

 

01

重組胰蛋白酶

 

胰蛋白酶是一種絲氨酸蛋白酶,可特異切割賴氨酸及精氨酸C末端形成的肽鍵。重組胰蛋白酶多用大腸桿菌或酵母系統(tǒng)重組表達(dá)并經(jīng)過多步層析純化獲得,無糜蛋白酶等雜酶污染。重組胰蛋白酶與天然提取的胰蛋白酶相比具有相同的特性,其氨基酸序列與豬源胰蛋白酶序列同源。因其無動物源污染性和純度高,在醫(yī)藥開發(fā)、生化研究、蛋白組學(xué)等領(lǐng)域中有著廣泛的應(yīng)用。

 

翌圣目前可提供2款重組胰蛋白酶,分別為藥典級(Cat#40512ES)、質(zhì)譜級(Cat#20416ES)

 

藥典級:大腸桿菌表達(dá)的重組胰蛋白酶,氨基酸序列與豬胰腺來源的胰蛋白酶一致,生產(chǎn)過程不使用任何動物源原料,無外源性的病毒污染,可替代豬胰腺來源胰蛋白酶應(yīng)用于各種生物技術(shù)過程中,如:細(xì)胞培養(yǎng)、細(xì)胞發(fā)酵、蛋白質(zhì)的酶解或各種組織的細(xì)胞分離等。本產(chǎn)品純度高、不含雜酶、宿主蛋白和 DNA 殘留量符合藥典標(biāo)準(zhǔn),避免了雜質(zhì)對細(xì)胞生長的影響,最適pH為7.0-9.0,pH為2±0.5。

 

質(zhì)譜級:畢赤酵母表達(dá)的重組豬胰蛋白酶,在GMP法規(guī)下生產(chǎn),不含任何動物源成分,無動物源性的病毒污染,天然缺乏糜蛋白酶活性,并已過濾除菌。胰蛋白酶活性以國際通用活性(USP)為準(zhǔn),優(yōu)于進(jìn)口同類產(chǎn)品,其中β-Trypsin的HPLC含量可達(dá)80%以上,儲存穩(wěn)定性高,蛋白質(zhì)組學(xué)酶解漏切率比進(jìn)口產(chǎn)品低50%??商娲鹊鞍酌甘褂?,且有很多優(yōu)勢,如無雜酶活性,高穩(wěn)定性,高活性;胰蛋白酶容易自切產(chǎn)生自身自切片段影響質(zhì)譜分析結(jié)果,而重組胰蛋白酶(質(zhì)譜級)通過甲基化修飾和突變保證其不自切,尤其適用于蛋白組學(xué)領(lǐng)域,如蛋白質(zhì)質(zhì)譜、測序、肽圖譜分析。

02
重組羧肽酶B
 

羧肽酶B又稱肽酰-L-賴氨酸(L-賴氨酸)水解酶、精蛋白酶,專一水解蛋白質(zhì)C-末端堿性氨基酸(賴氨酸、精氨酸、組氨酸)的氨基端;分子量為33.8 kD,等電點(diǎn)為6.0,最適pH為7.5-9.0。羧肽酶B的活性受精氨酸、賴氨酸的競爭性抑制,金屬離子螯合劑如EDTA等抑制酶活。

 

翌圣重組羧肽酶B采用大腸桿菌表達(dá),在GMP法規(guī)下生產(chǎn),不含任何動物源成分,無動物源性的病毒污染,氨基酸序列與大鼠胰腺羧肽酶B一致,具有與動物源性羧肽酶B相同的酶學(xué)性質(zhì),可替代動物源性羧肽酶 B用于各種生物技術(shù)過程中, 如重組胰島素及其類似物的生產(chǎn)、蛋白質(zhì)C-末端氨基酸的測定、蛋白質(zhì)C-末端組氨酸標(biāo)簽的去除、其他重組多肽類物質(zhì)的生產(chǎn)、某些特殊化合物的酶促合成。

03
重組雙堿性內(nèi)切酶
 

雙堿性內(nèi)切酶又稱為Kex2蛋白酶、YSCF蛋白酶,在酵母體內(nèi)Kex2蛋白酶負(fù)責(zé)加工killer toxin和α-factor的前體,是一種鈣離子依賴型的絲氨酸蛋白酶,能特異性識別和切割A(yù)rg-Arg、Lys-Arg等雙堿性氨基酸羧基端肽鍵。與胰蛋白酶(識別一個氨基酸殘基,對于目的蛋白序列的限制性較強(qiáng),且可能產(chǎn)生錯切等問題)不同,Kex2不能識別和切割單一堿性氨基酸即精氨酸或賴氨酸的羧基端肽鍵,所以Kex2這類識別數(shù)個氨基酸殘基、特異性較高的酶的生產(chǎn)制備對酶切的正確性尤為重要。并且Kex2蛋白酶活性不受常規(guī)的絲氨酸蛋白酶抑制劑如抑肽酶、PMSF、TPCK所抑制。

 

翌圣重組Kex2蛋白酶是由畢赤酵母表達(dá),在GMP法規(guī)下生產(chǎn),不含任何動物源成分,無動物源性的病毒污染,與天然的釀酒酵母Kex2酶具有相同的酶特異性。最適作用pH為pH9.0,穩(wěn)定儲存的pH為5.0-6.0。生物制藥領(lǐng)域常用Kex2蛋白酶聯(lián)合羧肽酶B用于重組胰島素及其類似物、GLP-1、重組多肽的生產(chǎn)制備,還可用于蛋白質(zhì)的酶解和肽圖分析、測序及融合標(biāo)簽的切割等。

 

 

 

選購指南

 

貨號

40512ES

20416ES

20417ES

20418ES

產(chǎn)品名稱

重組胰蛋白酶

(粉末)

 

重組胰蛋白酶

(質(zhì)譜級)

 

重組羧肽酶B

重組雙堿性內(nèi)切酶

來源

大腸桿菌

畢赤酵母

大腸桿菌

畢赤酵母

性狀

白色或類白色結(jié)晶性粉末

無色至淡黃色,澄清液體

白色、類白色、類黃色粉末

白色、類白色粉末

純度

β-trypsin≥70%

α-trypsin≤20%

β-trypsin80%

α-trypsin20% 

 

單一主條帶

單一主條帶

比活性

≥3800 USP units/mg 蛋白 

>6800 USP Unit/mg 蛋白

 

≥170 USP units/mg 蛋白

≥10.0 units/mg 蛋白

切割位點(diǎn)

特異切割賴氨酸或者精氨酸殘基中的羧基端肽鍵

特異切割賴氨酸或者精氨酸殘基中的羧基端肽鍵

專一水解蛋白質(zhì)C-末端堿性氨基酸(賴氨酸、精氨酸)的氨基端

特異性識別和切割A(yù)rg-Arg、Lys-Arg等雙堿性氨基酸羧基端肽鍵

應(yīng)用

可替代豬胰腺來源胰蛋白酶應(yīng)用于各種生物技術(shù)過程中,如:細(xì)胞培養(yǎng)、細(xì)胞發(fā)酵、蛋白質(zhì)的酶解或各種組織的細(xì)胞分離等。

重組蛋白方面:

1. 重組胰島素生產(chǎn);

 

可替代重組胰蛋白酶使用,且純度更高、活性更好。其不自切的特性,尤其適用于蛋白質(zhì)分析,如蛋白質(zhì)質(zhì)譜、測序、肽圖譜分析。

1. 重組胰島素及其類似物的生產(chǎn)。

2. 蛋白質(zhì)C-末端氨基酸的測定。

3. 蛋白質(zhì)C-末端組氨酸標(biāo)簽的去除。

4. 其他重組多肽類物質(zhì)的生產(chǎn)。

5. 某些特殊化合物的酶促合成

 

1. 重組胰島素及其類似物的前體加工

2. 多肽藥物生產(chǎn)中的的工藝酶切

3. 生物研究:蛋白質(zhì)的酶解和肽圖分析、測序等。

4. 可用于融合標(biāo)簽的切割

 

 

 

產(chǎn)品優(yōu)勢

 
  • 質(zhì)量高:純度高,比活高,宿主蛋白殘留小于生物制品限度要求;

  • 無動物源性:重組生產(chǎn),生產(chǎn)過程不使用任何動物源原料,無外源性病毒污染;

  • GMP生產(chǎn):可提供GMP級別產(chǎn)品;

  • 供應(yīng)穩(wěn)定:批量生產(chǎn),可保證穩(wěn)定連續(xù)的批次生產(chǎn);產(chǎn)品批次間無差異,質(zhì)量穩(wěn)定;

  • 多形式供貨:可供應(yīng)液體和凍干粉2種形式,液體裝方便使用,凍干粉方便運(yùn)輸和儲存。

 

 

 

產(chǎn)品信息

 

產(chǎn)品名稱

貨號

規(guī)格

目錄價(jià)/元

PerfCell™ Recombinant Trypsin(powder)

重組胰蛋白酶(粉末)

40512ES10/60/80

10 mg/100 mg

/1 g

328/2298/16188

Recombinant Trypsin(MS-SAFE)

重組胰蛋白酶(質(zhì)譜級)

20416ES60

100 µg

595

Carboxypeptidase B, Recombinant, Expressed in E.coli 大腸桿菌表達(dá)重組羧肽酶B

20417ES03/10

1 mg/10 mg

735/2285

Paired-basic endopeptidase, Recombinant, Expressed in Yeast 酵母表達(dá)重組雙堿性內(nèi)切酶

20418ES60

100 µg

1945



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