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近年來，全球爆發(fā)的傳染性疾?。ㄈ绨２├?、猴痘）對(duì)公共健康構(gòu)成了威脅，病原體的多樣化和復(fù)雜化對(duì)病原體檢測(cè)提出了更高的要求。傳統(tǒng)的病原體檢測(cè)方法如傳統(tǒng)培養(yǎng)法、PCR法等存在時(shí)效性、準(zhǔn)確性和范圍的限制。而宏基因組測(cè)序（mNGS）技術(shù)無需提前假設(shè)病原體的存在，覆蓋范圍廣泛，成為有效解決復(fù)雜病原體檢測(cè)需求的重要工具。
mNGS是對(duì)標(biāo)本中全部核酸進(jìn)行高通量測(cè)序（NGS測(cè)序），并通過生物信息學(xué)分析以識(shí)別標(biāo)本中病原體的檢測(cè)方法，已成功應(yīng)用于多種類型臨床感染性疾病的病原體診斷、突發(fā)傳染病的調(diào)查等領(lǐng)域。
mNGS面臨的挑戰(zhàn)
mNGS檢測(cè)流程主要分為樣本制備、文庫構(gòu)建、上機(jī)測(cè)序、數(shù)據(jù)分析四個(gè)流程（圖1），在上述涉及的相關(guān)實(shí)驗(yàn)過程中，酶在其中起著至關(guān)重要的作用。由于商業(yè)化分子酶主要采用工程菌株（如大腸桿菌等）進(jìn)行重組表達(dá)，因此分子酶中會(huì)存在一定量的宿主基因組DNA殘留。加上制備環(huán)境和人源等因素影響，分子酶制品中極易存在污染DNA。在病原體檢測(cè)過程中，污染的DNA可能會(huì)淹沒低豐度的靶標(biāo)核酸或和靶標(biāo)核酸一起被檢出，從而影響結(jié)果的判讀。
圖1. Illumina平臺(tái)mRNA文庫構(gòu)建及建庫關(guān)鍵酶[1]
翌圣超低殘留mNGS建庫酶原料
為解決病原檢測(cè)背景菌干擾問題，翌圣通過子公司鎂孚泰生物ZymeEditor™酶進(jìn)化平臺(tái)，開發(fā)出多種高性能分子酶，搭配超低殘留分子酶生產(chǎn)工藝與UCF.ME®超潔凈分子酶生產(chǎn)基地，可規(guī)?；峁┯糜趍NGS建庫的全套高性能產(chǎn)品和超低殘留分子酶原料，助力解決病原檢測(cè)中的背景菌干擾，提高檢測(cè)準(zhǔn)確度。
表1. 翌圣超低殘留mNGS建庫關(guān)鍵酶原料
應(yīng)用場(chǎng)景 | 產(chǎn)品名稱 | 殘留水平 |
末端修復(fù) | UCF.ME® T4 DNA Polymerase （超低殘留T4 DNA聚合酶） | 1、宿主DNA殘留低：E. coli基因組DNA殘留＜0.1 copies/1 U； 2、核酸酶殘留低：無核酸外切酶、切口酶殘留。 |
UCF.ME® T4 Polynucleotide kinase （超低殘留T4 多聚苷酸激酶） | 1、宿主DNA殘留低：E. coli基因組DNA殘留＜0.01 copies/ 1 U； 2、核酸酶殘留低：無核酸外切酶、切口酶殘留； | |
A尾添加 | Hieff UCF.ME®Sensitive Taq DNA Polymerase （超低殘留T4 DNA聚合酶） | 1、宿主DNA殘留低：E. coli基因組DNA殘留＜0.005 copies/ 1 U； 2、核酸酶殘留低：無核酸外切酶、切口酶、RNase殘留； |
翌圣UCF.ME® T4 Polynucleotide kinase
UCF.ME® T4 Polynucleotide kinase(Cat#14503ES)是翌圣生物推出的又一款mNGS關(guān)鍵酶。相較于常規(guī)T4 PNK，UCF.ME® T4 Polynucleotide kinase背景菌殘留更低，專注于解決病原檢測(cè)中的背景菌干擾，提高檢測(cè)準(zhǔn)確度。
部分?jǐn)?shù)據(jù)展示
E.coli基因組DNA殘留< 0.005 copies/1 U
對(duì)不同批次的翌圣超低殘留T4 PNK (Cat#14503ES)進(jìn)行宿主 (E.coli）基因組DNA殘留檢測(cè)，結(jié)果顯示翌圣超低殘留T4 PNK宿主gDNA殘留遠(yuǎn)低于0.005 copies/1 U。
圖2. T4 DNA PNK E.coli 基因組DNA殘留檢測(cè)
無切口酶、核酸外切酶殘留
將100 U不同批次的翌圣超低殘留T4 PNK (Cat#14503ES)分別與底物DNA在37℃孵育4 h，瓊脂糖凝膠電泳檢測(cè)結(jié)果表明，翌圣超低殘留T4 PNK無切口酶、核酸外切酶殘留。
圖3. 翌圣T4 DNA PNK無切口酶、外切酶殘留
相關(guān)產(chǎn)品推薦
定位 | 產(chǎn)品名稱 | 產(chǎn)品貨號(hào) |
末端修復(fù) | UCF.ME® T4 DNA Polymerase (3 U/μL) | 14457ES |
UCF.ME® T4 polynucleotide Kinase (10 U/μL) | 14503ES | |
A尾添加 | Hieff UCF.ME® Hotstart Sensitive Taq DNA Polymerase (5 U/μL) | 14314ES |
參考文獻(xiàn)：
1. Han D, Li Z, Li R, Tan P, Zhang R, Li J. mNGS in clinical microbiology laboratories: on the road to maturity. Crit Rev Microbiol. 2019 Sep-Nov;45(5-6):668-685.
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