HK-2 人腎皮質(zhì)近曲小管上皮細(xì)胞培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備：

1）準(zhǔn)備 角質(zhì)細(xì)胞無血清培養(yǎng)基或者 Defined K-SFM  ，添加對應(yīng)因子，1% P/S 來培養(yǎng)細(xì)胞。

備注:Defined K-SFM培養(yǎng)液包含兩個組份：基礎(chǔ)培養(yǎng)基1瓶+生長因子1管

2）培養(yǎng)條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37℃，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。

3）凍存液：培養(yǎng)液92.5%，7.5%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配。

4）傳代比例：如果沒有特別說明，收到細(xì)胞后的第一次傳代一般是1:2。傳代周期：4-6天，換液頻率：每周 2-3次。

備注：

1. 該細(xì)胞貼壁較慢，為使細(xì)胞貼壁更容易，建議可提前在培養(yǎng)皿/培養(yǎng)瓶中鋪0.25%的明膠溶液，并于貼壁24~48小時后再進(jìn)行后續(xù)操作。

2. 該細(xì)胞生長不能過密，請在生長密度80%時進(jìn)行傳代。

3.使用0.05%胰酶消化細(xì)胞，由于Defined K-SFM為無血清培養(yǎng)液無法終止胰酶消化，所以消化完成后要通過離心（建議125xg離心5到10分鐘）去除胰酶或者用帶10%血清的培養(yǎng)基來終止消化，再進(jìn)行后續(xù)操作。

細(xì)胞處理：

1） 凍存細(xì)胞的復(fù)蘇：

將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍，加入到含4-6mL培養(yǎng)基的離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心3-5min，棄去上清液，培養(yǎng)基重懸細(xì)胞。然后將細(xì)胞懸液加入含6-8ml培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶（或皿）中37℃培養(yǎng)過夜。第二天顯微鏡下觀察細(xì)胞生長情況和細(xì)胞密度。

2） 細(xì)胞傳代：如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。