HK-2 人腎皮質(zhì)近曲小管上皮細胞?培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準備
HK-2 人腎皮質(zhì)近曲小管上皮細胞培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準備:
1)準備 角質(zhì)細胞無血清培養(yǎng)基或者 Defined K-SFM ,添加對應(yīng)因子,1% P/S 來培養(yǎng)細胞。
備注:Defined K-SFM培養(yǎng)液包含兩個組份:基礎(chǔ)培養(yǎng)基1瓶+生長因子1管
2)培養(yǎng)條件: 氣相:空氣,95%;二氧化碳,5%。 溫度:37℃,培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3)凍存液:培養(yǎng)液92.5%,7.5%DMSO,現(xiàn)用現(xiàn)配。
4)傳代比例:如果沒有特別說明,收到細胞后的第一次傳代一般是1:2。傳代周期:4-6天,換液頻率:每周 2-3次。
備注:
1. 該細胞貼壁較慢,為使細胞貼壁更容易,建議可提前在培養(yǎng)皿/培養(yǎng)瓶中鋪0.25%的明膠溶液,并于貼壁24~48小時后再進行后續(xù)操作。
2. 該細胞生長不能過密,請在生長密度80%時進行傳代。
3.使用0.05%胰酶消化細胞,由于Defined K-SFM為無血清培養(yǎng)液無法終止胰酶消化,所以消化完成后要通過離心(建議125xg離心5到10分鐘)去除胰酶或者用帶10%血清的培養(yǎng)基來終止消化,再進行后續(xù)操作。
細胞處理:
1) 凍存細胞的復(fù)蘇:
將含有1mL細胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍,加入到含4-6mL培養(yǎng)基的離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心3-5min,棄去上清液,培養(yǎng)基重懸細胞。然后將細胞懸液加入含6-8ml培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶(或皿)中37℃培養(yǎng)過夜。第二天顯微鏡下觀察細胞生長情況和細胞密度。
2) 細胞傳代:如果細胞密度達80%-90%,即可進行傳代培養(yǎng)。
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