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微生物的保存方法很多，根據(jù)不同的微生物菌(毒)株或不同的實驗要求，可選用不同的保存方法，其中常見的有斜面保存法，穿刺保存法、液體石蠟保藏法、沙土管保存法、冷凍保存法、真空冷凍干燥保存法。其中真空冷凍干燥保存法方便復(fù)活、保存期長，運輸和保存方便，活菌率高。所以近幾年真空冷凍干燥被廣泛應(yīng)用在菌種保存領(lǐng)域。
駿德儀器實驗室菌種凍干機FD-304是一款專門針對菌種保存而設(shè)計的凍干機。利用安剖管架預(yù)凍好的樣品直接轉(zhuǎn)移擺放到凍干倉隔板上即可，容量大，操作簡便。316L醫(yī)用級不銹鋼材質(zhì)方形凍干倉，隔熱保溫效果好，真空性能好，有效避免樣品因干燥過程中升溫過快而發(fā)生樣品外形塌陷，活性降低等問題。是研究菌種保存客戶的理想選擇。
冷凍干燥是將菌體懸浮液冷凍到冰點以下，從而轉(zhuǎn)變?yōu)楣腆w結(jié)晶態(tài)，然后在低溫低壓(真空)下使固體升華而脫水的干燥方法。一般干燥處理過程會破壞微生物的細胞膜，引起細胞的大量死亡，因此需要添加保護劑，能夠使菌液密度均一，減少活菌在凍干過程中的機械效應(yīng)和溶質(zhì)效應(yīng)帶來的死亡。因此，在凍干前加入的保護劑配方就成為了至關(guān)重要的決定性因素，它既會影響到儲存期細胞的活性以及穩(wěn)定性，也會影響到復(fù)水時細胞存活率。
凍干法是長期保存細菌、酵母、真菌、病毒和立克次氏體的標(biāo)準(zhǔn)方法(在凍干前一般要加冷凍保護劑，這樣可使細胞免除在冷凍初期因形成冰晶而造成的損害。ATCC 常規(guī)用10%脫脂奶或12%蔗糖作為冷凍保護劑，而美國農(nóng)業(yè)部(USDA)的農(nóng)業(yè)研究服務(wù)機構(gòu)的實驗人員用?；蝰R血清作為微生物的冷凍保護劑(。在菌液中加入甘油和二甲亞砜(DMSO)也可防止冷凍中微生物的死亡，但實際操作中應(yīng)根據(jù)不同微生物決定應(yīng)用或不用保護劑。
保存菌種的步驟主要包括：
1、微生物培養(yǎng)，培養(yǎng)獲得健壯的菌種擴培液體。培養(yǎng)時根據(jù)菌種選擇不同的培養(yǎng)基。培養(yǎng)到對數(shù)期獲得大量健壯的菌種，保證菌體濃度，一般達到109的濃度.
2、離心收集菌體。通過離心法從液體培養(yǎng)基中獲得菌體。如果是固體培養(yǎng)基可以直接收集菌落，用保護劑溶解混勻。
3、將菌體、脫脂奶粉、海藻糖、蔗糖等保護劑在無菌水中混勻得到含有保護劑的菌體混懸液。
4、分裝。將菌體混懸液在無菌環(huán)境中分裝到無菌容器中，可以是安瓿瓶、西林瓶、EP、培養(yǎng)皿等。
5、預(yù)凍，預(yù)凍是非常關(guān)鍵的。預(yù)凍不好，菌體會死亡。要快速預(yù)凍，防止產(chǎn)生大冰晶造成細胞死亡。預(yù)凍要凍結(jié)實，保證預(yù)凍充分。
6、將預(yù)凍好的菌體，放入真空冷凍干燥設(shè)備中進行凍干。如果是設(shè)備帶預(yù)凍功能，也可以直接在凍干機上進行預(yù)凍。真空冷凍干燥時間和凍干曲線的 設(shè)計要根據(jù)菌種的不同和菌體混懸液的濃度等進行設(shè)計。凍干好后真空密封保存。
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