高效液相色譜儀操作流程為開機、超聲、排氣、走基線。
1、開機前先將流動相過濾和超聲:水流動相用混合濾膜(0.2μm)過濾,有機流動相用有機濾膜過濾,之后超聲脫氣15-20分鐘。(過濾的目的是除去流動相里的雜質(zhì),以免雜質(zhì)進入色譜柱堵塞色譜柱;超聲的目的是排除流動相里面的氣體,以防氣體進入色譜柱損害色譜柱,影響柱效能)
注意:試驗過程中由于只有0.45μm的混合濾膜,第一次使用時感覺效果不好,于是過濾水時同時使用兩張混合濾膜過濾水流動相。
2、超聲結(jié)束后,將流動相放置到規(guī)定位置(1號泵接水流動相,2號泵接有機流動相),開機逐個排氣(先啟動泵,排氣結(jié)束后再打開檢測器)。
3、排氣結(jié)束后,關(guān)閉所有排氣閥。先用純有機流動相沖洗色譜柱20-30分鐘,基線走穩(wěn)之后,再打開水流動相(注意:水流動相和有機流動相流速之和為1ml/min),繼續(xù)走基線,直到基線平穩(wěn)。
注意:實驗結(jié)束后,再用純有機流動相沖洗色譜柱20-30分鐘,沖出色譜柱內(nèi)殘留的樣品物質(zhì),預(yù)防長時間不使用儀器樣品的殘留物質(zhì)沉積在色譜柱內(nèi),導(dǎo)致下次使用難以沖出,色譜柱柱壓偏高,基線不穩(wěn),出現(xiàn)大量鬼峰。
4、走基線時,應(yīng)將進樣閥處于Load狀態(tài),用注射器進樣時應(yīng)快速進樣,進樣后將進樣閥立即扳回到Inject狀態(tài),此時液相系統(tǒng)開始進入采樣狀態(tài)。采樣結(jié)束后,可在數(shù)據(jù)分析里面查看分析結(jié)果并可進行編輯,也可以在脫機狀態(tài)下查看樣品的分析結(jié)果并編輯。
數(shù)據(jù)分析:
色譜得到的原始數(shù)據(jù)為色譜圖,我們需要對途中的色譜峰進行積分,獲得峰面積,并根據(jù)實驗需要,使用不同的方法進行定量計算,比如外標法,內(nèi)標法,面積百分比法等。
儀器還可以得到光譜或者質(zhì)譜信息,我們可以通過色譜柱數(shù)據(jù)軟件的對應(yīng)功能得到光譜圖及質(zhì)譜圖,獲得定性信息。
獲得所需信息后,可以利用色譜軟件將結(jié)果輸出成不同格式的報告,或?qū)⑻幚砗玫慕Y(jié)果導(dǎo)入其他軟件(如統(tǒng)計分析)進行二次處理。
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