簡(jiǎn)介

多重?zé)晒饷庖呓M化技術(shù)（簡(jiǎn)稱多色）基于酪氨酸信號(hào)放大 (Tyramide dignal amplification，TSA) 技術(shù)，是一類利用辣根過(guò)氧化酶 (HRP) 對(duì)靶蛋白或核酸進(jìn)行高密度原位標(biāo)記的酶學(xué)檢測(cè)方法。

帶有染料標(biāo)記的底物酪胺分子在過(guò)氧化氫氧化環(huán)境下，被抗體或探針固定的HRP轉(zhuǎn)化為具有短暫活性的中間狀態(tài)，然后被激活的中間態(tài)分子迅速與相接蛋白分子的富含電子區(qū)域（酪氨酸殘基）進(jìn)行穩(wěn)定的共價(jià)結(jié)合。

圖1 酪胺Tyramide的過(guò)氧化物酶反應(yīng)

為什么選擇多色？多色技術(shù)的優(yōu)點(diǎn)

1、同時(shí)標(biāo)記多種蛋白（最多9標(biāo)10色）；

2、一抗來(lái)源不再受限（同種屬多標(biāo)）；

3、連接辣根過(guò)氧化物酶的同種屬二抗；

4、強(qiáng)熒光防淬滅。

本期主要講解客戶對(duì)說(shuō)明書(shū)的一些疑惑，說(shuō)明書(shū)常見(jiàn)問(wèn)題一網(wǎng)打盡?。?！

圖2 愛(ài)必信多色試劑盒

重要提示?。。?/strong>

新的一年愛(ài)必信部分多色試劑盒染料和抗體更新，例如舊版本TSA520外觀是白色透明，新版本是黃色，老用戶不要誤會(huì)染料質(zhì)量問(wèn)題！

版本更新之后，新舊試劑盒請(qǐng)不要摻雜，試劑盒需配套使用！

圖3 新版染料TSA520

愛(ài)必信多色試劑盒說(shuō)明書(shū)問(wèn)題解析

1、脫蠟水合步驟中“10%中性福爾馬林浸片10min，滅菌水洗片1min，重復(fù)3次”目的是什么？我們以前做石蠟切片的時(shí)候沒(méi)有這一步。

答：這是后固定的步驟，固定充分的組織可以省略此步。

2、微波修復(fù)抗原每一輪染色都要做嗎？可以用抗體洗脫液替代嗎？抗體洗脫液用在哪個(gè)步驟？

答：染第一個(gè)抗體之前做抗原修復(fù)，是為了使被石蠟或者固定劑封閉的抗原決定簇重新暴露出來(lái)，使得抗體能夠識(shí)別到抗原；在染后面每一個(gè)抗體之前的抗原修復(fù)，目的是為了去除掉上一輪染色的抗體和殘留沒(méi)有結(jié)合上的染料，其實(shí)更準(zhǔn)確的叫法是“抗體洗脫”，也就是說(shuō)第一次的抗原修復(fù)是真正的抗原修復(fù)，后面的抗原修復(fù)實(shí)際上是“抗體洗脫”，“抗體洗脫”可以用抗體洗脫液(abs994)替換，特別是細(xì)胞、冰凍切片或者骨樣本，但第一次抗原修復(fù)不能被抗體洗脫液替代，冰凍切片可以不進(jìn)行抗原修復(fù)，染色效果欠佳時(shí)，可以考慮嘗試進(jìn)行抗原修復(fù)，推薦冰凍切片快速抗原修復(fù)液(5×)(abs9207)。

3、需要進(jìn)行內(nèi)源性過(guò)氧化氫封閉嗎？在哪一步進(jìn)行？是每輪都要做嗎？

答：需要進(jìn)行內(nèi)源性過(guò)氧化氫封閉，詳細(xì)的步驟是在血清封閉之前，3%的過(guò)氧化氫甲醇溶液室溫封閉10-15min，PBST洗三遍，再加血清封閉，過(guò)氧化氫封閉做一次就好了。

4、染DAPI之前是否還需要進(jìn)行抗原修復(fù)（指抗體洗脫）？

答：理論上是需要的，但是如果是冰凍切片經(jīng)過(guò)多輪洗脫之后，有很大的脫片風(fēng)險(xiǎn)，這種情況下，寧愿背景不太干凈，也不希望脫片，這一步可以不進(jìn)行抗原修復(fù)。

多色試劑盒買(mǎi)二送一?。?！ 活動(dòng)時(shí)間：2024年2月20日-3月31日

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