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利用Agilent熒光光度計實現(xiàn)熒光標(biāo)記樣品的檢測與定量分析

來源:上海分析儀器銷售中心   2024年03月10日 16:38  
   Agilent熒光光度計是一種常用的熒光分析儀器,用于檢測和定量分析熒光標(biāo)記樣品。它的工作原理是基于熒光發(fā)射的強度與樣品中熒光物質(zhì)的濃度成正比。
  一、Agilent熒光光度計主要由光源、激發(fā)濾光片、發(fā)射濾光片、樣品室和檢測器等部分組成。其工作原理如下:
  1.光源:產(chǎn)生紫外或可見光,照射到樣品上,使熒光物質(zhì)受到激發(fā)。
 
  2.激發(fā)濾光片:選擇性地允許特定波長的光線通過,使光源的其他波長光線被濾除,從而確保只有特定波長的光線能激發(fā)樣品。
 
  3.發(fā)射濾光片:選擇性地允許熒光發(fā)射的特定波長通過,使其他波長的光線被濾除,從而確保只有熒光發(fā)射的光線能被檢測器接收。
 
  4.樣品室:放置待測樣品的區(qū)域。
 
  5.檢測器:接收熒光發(fā)射的光線,將其轉(zhuǎn)換為電信號,然后通過放大和處理,顯示為熒光強度。
 Agilent熒光光度計
  二、熒光標(biāo)記樣品的制備
  熒光標(biāo)記樣品是指通過化學(xué)反應(yīng)將熒光染料連接到目標(biāo)分子上,使其具有熒光發(fā)射性質(zhì)。熒光標(biāo)記樣品的制備通常包括以下步驟:
  1.選擇合適的熒光染料:根據(jù)目標(biāo)分子的性質(zhì)和實驗要求,選擇具有適當(dāng)激發(fā)波長和發(fā)射波長的熒光染料。
 
  2.連接熒光染料:通過化學(xué)反應(yīng)將熒光染料連接到目標(biāo)分子上,形成熒光標(biāo)記樣品。
 
  3.樣品處理:將制備好的熒光標(biāo)記樣品置于樣品室中,確保其能被光源照射到。
 
  三、熒光標(biāo)記樣品的檢測與定量分析
  1.激發(fā)和發(fā)射波長的選擇:根據(jù)熒光染料的性質(zhì),選擇適當(dāng)?shù)募ぐl(fā)波長和發(fā)射波長。激發(fā)波長應(yīng)能使熒光染料產(chǎn)生更大吸收,發(fā)射波長應(yīng)能使熒光染料產(chǎn)生更大發(fā)射。
 
  2.熒光強度的測量:將熒光標(biāo)記樣品置于Agilent熒光光度計中,調(diào)整激發(fā)濾光片和發(fā)射濾光片的位置,使熒光染料受到激發(fā)并產(chǎn)生發(fā)射。檢測器接收熒光發(fā)射的光線,將其轉(zhuǎn)換為電信號,并顯示為熒光強度。
 
  3.熒光強度的定量分析:根據(jù)熒光強度與樣品中熒光物質(zhì)濃度之間的關(guān)系,可以對熒光標(biāo)記樣品進(jìn)行定量分析。通常,需要繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線,即在已知濃度的標(biāo)準(zhǔn)溶液中測量熒光強度,然后將熒光強度與濃度進(jìn)行回歸分析,得到標(biāo)準(zhǔn)曲線。再將待測樣品的熒光強度代入標(biāo)準(zhǔn)曲線,即可得到待測樣品中熒光物質(zhì)的濃度。

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