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實驗室常用細胞裂解方法介紹

來源:上海遠慕生物科技有限公司   2024年03月11日 09:58  

  細胞破碎是指利用外力破壞細胞膜和細胞壁,使細胞內容物包括目的產物成分釋放出來的技術,是分離純化細胞內合成的非分泌型生化物質(產品)的基礎。結合重組DNA技術和組織培養(yǎng)技術上的重大進展,以前認為很難獲得的蛋白質現(xiàn)在可以大規(guī)模生產。

  ??但是由于細菌、酵母、植物細胞壁的組成成分不同,且同類細胞結成的網狀結構也不同,所以其細胞壁的堅固程度不同。而動物細胞雖沒有細胞壁,但具有細胞膜,也需要一定的細胞破碎方法來破膜,達到提取產物的目的。

  一般用物理或者化學方法來使得細胞裂解

  物理法:

 ?。?)反復凍融:將細胞反復放置于-20℃冷凍以及25-30℃環(huán)境下,反復冷凍溶解10次-20次。適用于例如血細胞等大部分哺乳動物細胞。

 ?。?)煮沸法:與凍融法相反,將細胞放置于100℃沸水煮沸5-10分鐘,適用于大部分微生物細胞。

 ?。?)超聲法:將細胞放置于超聲破碎儀中,以一定頻率的超聲破碎細胞,適用于絕大部分微生物細胞。

 ?。?)滲透壓法:將血細胞等細胞膜較為薄弱的細胞放置于純水等低滲溶液,細胞吸收大量水分破解。

 ?。?)液氮法:植物細胞一般采用液氮捻磨的方法破解細胞。

  化學法:

 ?。?)強酸、強堿溶液:一般應用0.5N NaOH溶液可以裂解絕大部分動物細胞和微生物細胞。

 ?。?)生物酶:一般用溶jun酶、蛋白酶K等酶裂解微生物細胞。


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