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【細(xì)胞培養(yǎng)】支原體污染來(lái)源及影響說(shuō)明

來(lái)源:上海遠(yuǎn)慕生物科技有限公司   2024年03月14日 09:49  

  支原體(Mycoplasma)是一種大小介于細(xì)菌和病毒之間(0.1 - 0.6μm),沒(méi)有細(xì)胞壁、并獨(dú)立生活原核生物,形態(tài)呈高度多形性,呈圓形、絲狀或梨形。由于支原體直徑較小,進(jìn)行除菌過(guò)濾是,約1%的支原體可以直接穿過(guò)常規(guī)的0.22μm的微孔除菌濾膜,造成細(xì)胞的支原體污染。


血清 (2).jpg

  支原體污染的來(lái)源包括:

 ?。?)工作環(huán)境的污染,實(shí)驗(yàn)器材帶來(lái)的污染;

  (2)操作者本身的污染(一些支原體在人體是正常菌群);

  (3)已受污染的培養(yǎng)基、血清,或用來(lái)制備細(xì)胞的原始組織或器官的污染;

  (4)污染支原體的細(xì)胞造成的交叉污染。

  目前,已發(fā)現(xiàn)的支原體品種有100多種,但根據(jù)國(guó)內(nèi)外相關(guān)研究發(fā)現(xiàn),大約有二十多種支原體能污染細(xì)胞,有的細(xì)胞株可以同時(shí)污染兩種以上的支原體。

  以下13種支原體污染在全部支原體污染中所占比例超過(guò)99%。(1)M. orale、(2)M.Arginini、(3)M.Hyorhinis、(4)A.Laidlawii、(5)M.Fermentans、(6)M. salivarium、(7)M.pirum、(8)M. hominis、(9)M. agalactiae、(10)M.bovis、(11)M. buccale、(12)M. arthritidis、(13)M. pulmonis。其中尤其是前四種:M.orale(口腔支原體)、M.arginini(精氨酸支原體)、M.hyorhinis(豬鼻支原體)和A.laidlawii(萊氏無(wú)膽甾原體)所占污染比例超過(guò)95%,前8種占比超過(guò)98%。

  支原體通常附著在細(xì)胞的表面,并影響其宿主細(xì)胞的生理、遺傳等多方面的正常功能,用這些污染后貌似正常的細(xì)胞做試驗(yàn)或生產(chǎn),將會(huì)嚴(yán)重影響結(jié)果。

  1、對(duì)細(xì)胞生長(zhǎng)繁殖和形態(tài)的影響

  細(xì)胞培養(yǎng)物被支原體污染后生長(zhǎng)減慢,且產(chǎn)生細(xì)胞病變(cytopathic effect, CPE),表現(xiàn)為細(xì)胞體積增大,碎片增多,在細(xì)胞質(zhì)中產(chǎn)生一些顆粒;細(xì)胞內(nèi)病毒繁殖受阻,使細(xì)胞形成空斑。光鏡下形成不正常密度生長(zhǎng)的單層,貼壁細(xì)胞形成“流沙樣”脫落、裂解。某些支原體可在侵入細(xì)胞8h使線粒體膨脹,繼而被破壞,細(xì)胞核wei縮呈空泡化,細(xì)胞微管解聚,培養(yǎng)瓶中細(xì)胞與細(xì)胞間隙出現(xiàn)膜狀沉積,細(xì)胞無(wú)法傳代,甚至整個(gè)細(xì)胞群體溶解。

  2、對(duì)細(xì)胞代謝和功能的影響

  有些被污染后的細(xì)胞,雖形態(tài)上變化不明顯,但培養(yǎng)液pH變化較大,更換培養(yǎng)液后幾小時(shí)就變酸,培養(yǎng)基中的必需氨基酸被消耗掉,如谷氨酸或核苷前體,改變細(xì)胞代謝。

  支原體吸附在細(xì)胞表面,破壞細(xì)胞膜的完整性,影響細(xì)胞信號(hào)傳遞;消耗細(xì)胞的核苷庫(kù),引起細(xì)胞染色體異常;發(fā)酵型支原體能迅速降解簡(jiǎn)單糖類(lèi),代謝產(chǎn)生的酸能改變細(xì)胞的功能;利用精氨酸的支原體則發(fā)生精氨酸效應(yīng),從而影響蛋白質(zhì)和核酸的合成、導(dǎo)致細(xì)胞的分裂和生長(zhǎng)受阻;引起細(xì)胞酶譜改變;由于支原體對(duì)細(xì)胞膜的吸附,干擾膜受體的功能,改變信號(hào)傳遞,破壞膜的完整性。在單克隆抗體制備中,骨髓瘤或雜交瘤細(xì)胞因支原體的污染而導(dǎo)致融合失敗或抗體分泌能力下降以至喪失。

  3、引起染色體異常

  改變?nèi)旧w組型,通??蓪?dǎo)致細(xì)胞染色體斷裂、數(shù)目減少,出現(xiàn)雙著絲點(diǎn)染色體、環(huán)狀染色體等。

  4、對(duì)免疫細(xì)胞產(chǎn)量的影響

  支原體能影響巨噬細(xì)胞的活性,抑制干擾素的合成和降低其活性,加大了繼發(fā)感染其他細(xì)菌和病毒的幾率,同時(shí),通過(guò)植物血凝素干擾淋巴細(xì)胞的刺激、分化。

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