膠原雜交肽(CHP)是一種新穎的多肽,在體外和體內(nèi)都能特異性地結(jié)合未折疊的膠原鏈。[1,2,3]通過共享天然膠原的Gly-X-Y重復(fù)序列,CHP具有通過改造三螺旋結(jié)構(gòu)與變性膠原鏈雜交的強大能力以類似于DNA片段退火成互補DNA鏈的方式。chp是非常特異的:由于缺乏結(jié)合位點,它對完整的膠原分子的親和力可以忽略不計,并且由于其中性和親水性,它對非特異性結(jié)合是惰性的。
CHP是一種強大的組織病理學(xué)工具,可以直接檢測多種疾病引起的炎癥和組織損傷,以及在發(fā)育和豪老過程中的組織重塑。[3]CHP在三維膠原培養(yǎng)中有力地顯示了癌細(xì)胞蛋白水解酶遷移引起的細(xì)胞周圍基質(zhì)轉(zhuǎn)換,不使用合成的含氟基質(zhì)或轉(zhuǎn)基因細(xì)胞。[4]CHP可以在分子水平上測量和定位膠原組織的機械損傷。[5]它還可以評估去細(xì)胞外基質(zhì)中的膠原變性。[6]此外,CHP可用于SDS-PAGE凝膠中膠原條帶的特異性顯示,無需蛋白印跡。
熒光F-CHP是一種常用于生物標(biāo)記和熒光成像的熒光染料。它具有優(yōu)良的熒光性能,包括強熒光信號和良好的光穩(wěn)定性,適用于多種生物學(xué)應(yīng)用。熒光F-CHP的化學(xué)結(jié)構(gòu)使其在蛋白質(zhì)、核酸和其他生物分子的標(biāo)記中表現(xiàn)出色。這種熒光染料在細(xì)胞和分子生物學(xué)研究中廣泛應(yīng)用,可用于追蹤生物分子的位置、運動和相互作用。由于其出色的性能和多功能性,熒光F-CHP在生命科學(xué)領(lǐng)域中扮演著重要的角色,為研究人員提供了強大的工具來探索生物體系的復(fù)雜性。
艾美捷熒光F-CHP直接在SDS-PAGE凝膠中可靠地測量I型膠原蛋白的稀釋系列,并檢測到含有少至5ng蛋白質(zhì)的條帶(左)。CHP可識別多種膠原類型(中),由于其中性和親水性,對ECM(中)和細(xì)胞裂解液(右)中的非膠原分子沒有親和力。
用 Typhoon Imager 熒光成像記錄(λex: 488 nm). .
此外,CHP可用于替代不成功的膠原抗體或常規(guī)膠原染色檢測高度變性組織中的膠原蛋白[1]。 下圖顯示了完-全加熱的豬韌帶切片中完整的膠原含量,通過F-CHP或B-CHP可見(進一步通過酶標(biāo)NeutrAvidin檢測)。CHP染色對膠原蛋白的特異性比傳統(tǒng)的膠原蛋白染色(如Sirus Red)更高,后者依賴于膠原蛋白結(jié)合的正電荷,可以對其他堿性氨基酸含量高的蛋白質(zhì)進行非特異性染色。
熒光F-CHP文獻參考:
[1]Targeting and mimicking collagens via triple helical peptide assemblies.Current Opinion in Chemical Biology,2013,17,968-975.
[2]In situ imaging of tissue remodeling with collagen hybridizing peptides.ACS Nano,2017,11,9825-9835.
[3]Targeting collagen strands by photo-triggered triple-helix hybridization.Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America,2012,109,14767-14772.
[4]Visualizing collagen proteolysis by peptide hybridization:From 3D cell culture to in vivo imaging.Biomaterials,2018,183,67-76.
[5]Direct detection of collagenous proteins by fluorescently labeled collagen mimetic peptides.Bioconjugate Chemistry,2013,24,9-16.
[6]Molecular level detection and localization of mechanical damage in collagen enabled by collagen hybridizing peptides.Nature Communications,2017,8,14913,doi:10.1038/ncomms14913.
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