使用 dsGreen 染料進(jìn)行 qPCR

來源：上海牧榮生物科技有限公司 2024年03月18日 11:49

dsGreen 是一種非常靈敏的染料，用于檢測雙鏈 DNA (dsDNA)。兩種染料均用于實時 qPCR 實驗中擴(kuò)增的非特異性檢測。

如果 dsGreen 試劑儲存溫度低于 20 °С，請將其解凍并保存在室溫下。為了快速解凍，可將試劑加熱至 50 °С。
根據(jù) PCR 試劑制造商的說明計算反應(yīng)所需試劑的體積。請注意，dsGreen（庫存 100х）必須在 PCR 主混合物中稀釋至最高 1 倍濃度。
根據(jù) PCR 試劑制造商的說明制備不含 DNA 的 1x 主混合物，添加必要量的 dsGreen。如果您使用不帶熱啟動的 Taq 聚合酶，請將預(yù)混液和 PCR 管放在冰上。
將主混合物轉(zhuǎn)移至管或板中并添加 DNA。
根據(jù)您的儀器制造商的說明繼續(xù)進(jìn)行放大。

qPCR 實驗中始終包含陽性和陰性對照。 qPCR 擴(kuò)增的溫度程序與給定模板和引物的標(biāo)準(zhǔn) PCR 程序沒有區(qū)別。對于檢測，應(yīng)使用 FAM 通道。為了能夠區(qū)分特定產(chǎn)物和引物二聚體，請在 PCR 程序中使用熔解曲線步驟。

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