手機(jī)版
化工儀器網(wǎng)手機(jī)版
化工儀器網(wǎng)小程序
官方微信
公眾號(hào)：chem17
掃碼關(guān)注視頻號(hào)
用生化培養(yǎng)箱做免疫熒光實(shí)驗(yàn)
用生化培養(yǎng)箱做免疫熒光實(shí)驗(yàn)的流程如下： 1、細(xì)胞準(zhǔn)備 （1）取出生長(zhǎng)狀態(tài)良好的細(xì)胞，棄培養(yǎng)基，消化重懸細(xì)胞。（2）將24孔圓形爬片放入24孔板的孔中。 （3）根據(jù)細(xì)胞生長(zhǎng)特性取適量細(xì)胞于已鋪爬片的24孔板中，放入37℃生化培養(yǎng)箱培養(yǎng)。 2、固定 （1）取出細(xì)胞，棄去培養(yǎng)基，用PBS洗細(xì)胞3次。 （2）每孔加入1mL的4%多聚甲醛，室溫固定10-20min，棄去多聚甲醛； （3）加入1mL的PBS清洗細(xì)胞，重復(fù)兩次。 3、通透 （1）每孔加入1mL的0.5% Triton-X100 ，室溫10min，棄去Triton-X100。 （2）加入1mL的PBS清洗細(xì)胞，5min，棄PBS。重復(fù)兩次。 4、封閉 每孔中加入1mL的3%BSA封閉液，室溫封閉1h。棄封閉液。 5、一抗結(jié)合 （1）向爬片上滴加稀釋好的一抗，用錫箔紙包住24孔板外面，輕柔的將24 孔板放置于4℃生化培養(yǎng)箱中，過(guò)夜孵育。 （2）加入1mL的PBS清洗細(xì)胞，5min，棄PBS。重復(fù)五次。 6、二抗結(jié)合 （1）加封閉液稀釋的二抗室溫避光孵育1h。 （2）加入1mL的PBS清洗細(xì)胞，5min，棄PBS。重復(fù)五次。 7、DAPI染色 （1）按照1：4000比例用1×PBS稀釋DAPI工作液（參照廠家說(shuō)明書(shū)），并向每個(gè)孔中加入1mL的DAPI工作液，避光靜置染色10min。 （2）加入1mL的PBS清洗細(xì)胞，5min，棄PBS。重復(fù)三次。 8、封片及檢測(cè) （1）將爬片小心取出，用吸水紙吸干多余液體，加5μl的抗熒光淬滅劑到載玻片上。 （2）將爬片倒置載玻片上，周圍涂指甲油固定。 （3）4℃生化培養(yǎng)箱暫存或直接激光共聚焦顯微鏡拍攝。
|
相關(guān)產(chǎn)品
免責(zé)聲明
- 凡本網(wǎng)注明“來(lái)源：化工儀器網(wǎng)”的所有作品，均為浙江興旺寶明通網(wǎng)絡(luò)有限公司-化工儀器網(wǎng)合法擁有版權(quán)或有權(quán)使用的作品，未經(jīng)本網(wǎng)授權(quán)不得轉(zhuǎn)載、摘編或利用其它方式使用上述作品。已經(jīng)本網(wǎng)授權(quán)使用作品的，應(yīng)在授權(quán)范圍內(nèi)使用，并注明“來(lái)源：化工儀器網(wǎng)”。違反上述聲明者，本網(wǎng)將追究其相關(guān)法律責(zé)任。
- 本網(wǎng)轉(zhuǎn)載并注明自其他來(lái)源（非化工儀器網(wǎng)）的作品，目的在于傳遞更多信息，并不代表本網(wǎng)贊同其觀點(diǎn)和對(duì)其真實(shí)性負(fù)責(zé)，不承擔(dān)此類作品侵權(quán)行為的直接責(zé)任及連帶責(zé)任。其他媒體、網(wǎng)站或個(gè)人從本網(wǎng)轉(zhuǎn)載時(shí)，必須保留本網(wǎng)注明的作品第一來(lái)源，并自負(fù)版權(quán)等法律責(zé)任。
- 如涉及作品內(nèi)容、版權(quán)等問(wèn)題，請(qǐng)?jiān)谧髌钒l(fā)表之日起一周內(nèi)與本網(wǎng)聯(lián)系，否則視為放棄相關(guān)權(quán)利。
采購(gòu)中心