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96孔板接種細(xì)胞鋪勻詳細(xì)步驟

來源:上海遠(yuǎn)慕生物科技有限公司   2024年03月21日 10:41  

  做實(shí)驗(yàn),細(xì)胞鋪勻是常見的一種。然而,有許多人不是很成功,分布也不均勻:要么中間密集,周圍稀疏,要么周圍密集,中間禿頂。以下是利用96孔板把細(xì)胞鋪勻,希望對(duì)大家有用!


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  方法/步驟

  1、通常,在96孔板的每個(gè)孔中加入100微升細(xì)胞懸浮液。 從底部附近的井的左側(cè)添加細(xì)胞懸浮液。 加入一半平板后,混合細(xì)胞懸液,不要再加入,繼續(xù)加入剩余的一半平板。 添加完所有板后,蓋上板,用左手輕輕握住板的左側(cè),用右手輕輕輕敲板的右邊緣,注意抓力(我通常輕敲三次)。 如果它太強(qiáng)或太多次,細(xì)胞就會(huì)被濃縮和堆積。 順時(shí)針旋轉(zhuǎn)盤子(逆時(shí)針效果不好),依次敲擊剩余的三面,靜置約5分鐘,放入37度培養(yǎng)箱中。

  對(duì)于6孔板、12孔板或24孔板,我在第一個(gè)孔中加入少量無血清培養(yǎng)基,搖動(dòng)并滲透到整個(gè)孔的底部,然后用移液管槍將整個(gè)孔的底部吸到第二個(gè)孔中。用同樣的方法滲透到井底,同時(shí)模擬其它井,這樣整個(gè)井底都是濕的,細(xì)胞懸浮液將平放在整個(gè)井底。 加入細(xì)胞懸液時(shí),可以避免中間加入更多細(xì)胞,中間加入更少細(xì)胞的現(xiàn)象,細(xì)胞分散更均勻。 注意,加入細(xì)胞懸液后,細(xì)胞懸液應(yīng)放在工作臺(tái)上靜置。這個(gè)方法有點(diǎn)慢,但是當(dāng)你熟練的時(shí)候它并不慢。也可以涂抹,但強(qiáng)度不如96孔板,效果不如96孔板,所以我放棄了滲透井底的方法。

  2、加入細(xì)胞懸液后,抬起細(xì)胞培養(yǎng)板,從底部向上觀察光線,看細(xì)胞是否聚集。然后從底部敲擊以分散它。

  3、如果實(shí)驗(yàn)室有平板振蕩器,建議用這個(gè)儀器輕微振蕩。 效果好,即振幅小、頻率高。

  4、細(xì)胞應(yīng)該盡可能分散,大多數(shù)細(xì)胞處于單一狀態(tài)。離心后,wan全懸浮!有轉(zhuǎn)移到六孔板上的,就是震動(dòng)!搖晃時(shí),不要讓細(xì)胞液轉(zhuǎn)向,否則細(xì)胞會(huì)全部被帶到中間而不均勻!

  5、當(dāng)一瓶細(xì)胞裝滿后,進(jìn)行正常處理。 將它均勻地吹進(jìn)培養(yǎng)瓶中,然后鋪上6孔板,每孔2ml。 涂抹后,不用觀察直接用酒精棉擦拭,然后放入培養(yǎng)箱中。 稍微向左三圈,向右三圈,先三圈,然后三圈?;旧希?4小時(shí)后,每個(gè)孔中的細(xì)胞將非常均勻。

  6、計(jì)算所有所需的液體和細(xì)胞數(shù)量,混合均勻,并將其添加到六孔板中。 六孔板呈水平8字形波動(dòng)。 在顯微鏡下觀察。 如果不均勻,按照上述方法再次搖動(dòng)。如果細(xì)胞沒有計(jì)數(shù)并直接種植,在種植六孔板的過程中隨時(shí)搖動(dòng)混合瓶。 我通常順時(shí)針或逆時(shí)針轉(zhuǎn)動(dòng)瓶子。

  7、先上下移動(dòng),然后在水平板上左右移動(dòng),每個(gè)方向移動(dòng)5-6次,但關(guān)鍵是搖動(dòng)后直接放入培養(yǎng)箱,不要做太多的運(yùn)動(dòng),如照鏡子,否則很容易在中間再次聚在一起。

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