手機版
化工儀器網(wǎng)手機版
化工儀器網(wǎng)小程序
官方微信
公眾號：chem17
掃碼關(guān)注視頻號
細胞株是用單細胞分離培養(yǎng)或通過篩選的方法，由單細胞增殖形成的細胞群。細胞株的特殊性質(zhì)或標志必須在整個培養(yǎng)期間始終存在。然而，細胞株在體外培養(yǎng)的過程中會出現(xiàn)一些問題，比如：細胞株無法在培養(yǎng)皿上貼壁生長，細胞株生長緩慢，細胞株死亡等。那么該如何解決呢？
一、細胞株無法在培養(yǎng)器皿上貼壁生長
細胞株胰酶消化過度：縮短胰酶消化時間或減少胰酶用量。
2.支原體污染：隔離細胞株，檢測是否感染支原體；清洗通風廚和培養(yǎng)箱，如細胞株被污染，滅菌處理后丟棄。
3.培養(yǎng)基中無附著因子：如果使用的是無血清配方，應確保含有附著因子或者使用經(jīng)過包被的培養(yǎng)板。
二、細胞株生長緩慢
培養(yǎng)基或血清改變：比較不同培養(yǎng)基配方中葡萄糖、氨基酸及其他成分有無差異；通過生長實驗比較新老批次血清有無差異；增大細胞株初始接種密度；使細胞株逐步適應新的培養(yǎng)基。
2.必需生長促進成分（如L-谷氨酰胺或生長因子）耗竭、缺乏或分解：去除原培養(yǎng)基，加入新鮮培養(yǎng)基；向培養(yǎng)基中添加生長促進成分（如L-谷氨酰胺）。
3.輕度細菌或真菌污染：在不添加抗生素的條件下進行培養(yǎng)，如細胞被污染，滅菌處理后丟棄。
4.時間存儲不當：血清應于-5℃至-20℃下儲存；培養(yǎng)基應于2℃~8℃下避光儲存；盡量減少血清和培養(yǎng)基見光時間。
5.細胞株初始接種密度低：增大活細胞接種密度。
6.細胞株衰老、老化：將老化細胞丟棄，取用代數(shù)較少的細胞。
7.支原體污染：隔離細胞株，檢測是否感染支原體；清洗通風廚和培養(yǎng)箱，如細胞被污染，滅菌處理后丟棄。
三、培養(yǎng)基pH值變化迅速
1.培養(yǎng)箱CO2分壓設(shè)置錯誤：根據(jù)培養(yǎng)基中NaHCO3的濃度增大或降低培養(yǎng)箱CO2的分壓，NaHCO3濃度為2.0-3.7g/L時，應相應地使用5%-10%的CO2分壓。
2.細胞培養(yǎng)瓶瓶蓋過緊：將瓶蓋旋松1/4圈。
3.碳酸氫鹽緩存系統(tǒng)緩沖能力不足：加入HEPES緩沖液，使其終濃度為10-25mM。
4.培養(yǎng)基中鹽含量不正確：CO2平衡環(huán)境中使用以Earle平衡鹽為基礎(chǔ)的培養(yǎng)基，大氣條件下使用以Hanks平衡鹽為基礎(chǔ)的培養(yǎng)基。
以上就是細胞株在培養(yǎng)過程中可能出現(xiàn)的問題、原因以及解決方法，希望可以幫助大家在培養(yǎng)細胞株過程中遇到的困難，僅供參考。
5.細菌、酵母或真菌污染：將細胞和培養(yǎng)基滅菌處理后丟棄。
5.細菌、酵母或真菌污染：將細胞和培養(yǎng)基滅菌處理后丟棄。
四、細胞株凋亡
培養(yǎng)箱中無CO2：監(jiān)測培養(yǎng)箱中CO2使用速度以便確定及時更換氣瓶；經(jīng)常檢測管路連接處是否漏氣；不要頻繁開啟培養(yǎng)箱門。
2.培養(yǎng)箱內(nèi)溫度有波動：監(jiān)測培養(yǎng)箱內(nèi)溫度，及時校正。
3.使用抗生素達到毒性濃度：減少抗生素的用量；使用無血清培養(yǎng)基時，抗生素濃度應降低至1/10。
4.細胞株復蘇或凍存時受到損傷：取用新的細胞。
5.培養(yǎng)基的滲透壓不合適：檢查wan全培養(yǎng)基的滲透壓。大多數(shù)哺乳動物細胞可耐受260~350mOsm/kg的滲透壓，加入某些試劑和藥物后會影響培養(yǎng)基的滲透壓；昆蟲細胞培養(yǎng)基的滲透壓（340~380mOsm/kg）要高于哺乳動物細胞。
6.培養(yǎng)基中毒性代謝產(chǎn)物蓄積：去除原培養(yǎng)基，換用新鮮培養(yǎng)基。
五、懸浮細胞株集成團
存在鈣離子和鎂離子：用不含鈣離子和鎂離子的平衡鹽溶液清洗細胞，輕輕吹打細胞，使其形成單細胞懸液。
2.支原體污染：隔離細胞，檢測是否感染支原體；清洗通風廚和培養(yǎng)箱，如細胞被污染，滅菌處理后丟棄。
3.蛋白水解酶消化過度導致細胞裂解、DNA釋放：用0.001%DNA酶I處理細胞；用PBS沖洗后再接種到新培養(yǎng)基中。
相關(guān)產(chǎn)品
免責聲明
- 凡本網(wǎng)注明“來源：化工儀器網(wǎng)”的所有作品，均為浙江興旺寶明通網(wǎng)絡有限公司-化工儀器網(wǎng)合法擁有版權(quán)或有權(quán)使用的作品，未經(jīng)本網(wǎng)授權(quán)不得轉(zhuǎn)載、摘編或利用其它方式使用上述作品。已經(jīng)本網(wǎng)授權(quán)使用作品的，應在授權(quán)范圍內(nèi)使用，并注明“來源：化工儀器網(wǎng)”。違反上述聲明者，本網(wǎng)將追究其相關(guān)法律責任。
- 本網(wǎng)轉(zhuǎn)載并注明自其他來源（非化工儀器網(wǎng)）的作品，目的在于傳遞更多信息，并不代表本網(wǎng)贊同其觀點和對其真實性負責，不承擔此類作品侵權(quán)行為的直接責任及連帶責任。其他媒體、網(wǎng)站或個人從本網(wǎng)轉(zhuǎn)載時，必須保留本網(wǎng)注明的作品第一來源，并自負版權(quán)等法律責任。
- 如涉及作品內(nèi)容、版權(quán)等問題，請在作品發(fā)表之日起一周內(nèi)與本網(wǎng)聯(lián)系，否則視為放棄相關(guān)權(quán)利。
采購中心