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細(xì)胞株培養(yǎng)過程中常見問題解決

來源:上海遠(yuǎn)慕生物科技有限公司   2024年03月22日 09:49  

   細(xì)胞株是用單細(xì)胞分離培養(yǎng)或通過篩選的方法,由單細(xì)胞增殖形成的細(xì)胞群。細(xì)胞株的特殊性質(zhì)或標(biāo)志必須在整個(gè)培養(yǎng)期間始終存在。然而,細(xì)胞株在體外培養(yǎng)的過程中會(huì)出現(xiàn)一些問題,比如:細(xì)胞株無法在培養(yǎng)皿上貼壁生長,細(xì)胞株生長緩慢,細(xì)胞株死亡等。那么該如何解決呢?


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  一、細(xì)胞株無法在培養(yǎng)器皿上貼壁生長

  細(xì)胞株胰酶消化過度:縮短胰酶消化時(shí)間或減少胰酶用量。

  2.支原體污染:隔離細(xì)胞株,檢測是否感染支原體;清洗通風(fēng)廚和培養(yǎng)箱,如細(xì)胞株被污染,滅菌處理后丟棄。

  3.培養(yǎng)基中無附著因子:如果使用的是無血清配方,應(yīng)確保含有附著因子或者使用經(jīng)過包被的培養(yǎng)板。

  二、細(xì)胞株生長緩慢

  培養(yǎng)基或血清改變:比較不同培養(yǎng)基配方中葡萄糖、氨基酸及其他成分有無差異;通過生長實(shí)驗(yàn)比較新老批次血清有無差異;增大細(xì)胞株初始接種密度;使細(xì)胞株逐步適應(yīng)新的培養(yǎng)基。

  2.必需生長促進(jìn)成分(如L-谷氨酰胺或生長因子)耗竭、缺乏或分解:去除原培養(yǎng)基,加入新鮮培養(yǎng)基;向培養(yǎng)基中添加生長促進(jìn)成分(如L-谷氨酰胺)。

  3.輕度細(xì)菌或真菌污染:在不添加抗生素的條件下進(jìn)行培養(yǎng),如細(xì)胞被污染,滅菌處理后丟棄。

  4.時(shí)間存儲(chǔ)不當(dāng):血清應(yīng)于-5℃至-20℃下儲(chǔ)存;培養(yǎng)基應(yīng)于2℃~8℃下避光儲(chǔ)存;盡量減少血清和培養(yǎng)基見光時(shí)間。

  5.細(xì)胞株初始接種密度低:增大活細(xì)胞接種密度。

  6.細(xì)胞株衰老、老化:將老化細(xì)胞丟棄,取用代數(shù)較少的細(xì)胞。

  7.支原體污染:隔離細(xì)胞株,檢測是否感染支原體;清洗通風(fēng)廚和培養(yǎng)箱,如細(xì)胞被污染,滅菌處理后丟棄。

  三、培養(yǎng)基pH值變化迅速

  1.培養(yǎng)箱CO2分壓設(shè)置錯(cuò)誤:根據(jù)培養(yǎng)基中NaHCO3的濃度增大或降低培養(yǎng)箱CO2的分壓,NaHCO3濃度為2.0-3.7g/L時(shí),應(yīng)相應(yīng)地使用5%-10%的CO2分壓。

  2.細(xì)胞培養(yǎng)瓶瓶蓋過緊:將瓶蓋旋松1/4圈。

  3.碳酸氫鹽緩存系統(tǒng)緩沖能力不足:加入HEPES緩沖液,使其終濃度為10-25mM。

  4.培養(yǎng)基中鹽含量不正確:CO2平衡環(huán)境中使用以Earle平衡鹽為基礎(chǔ)的培養(yǎng)基,大氣條件下使用以Hanks平衡鹽為基礎(chǔ)的培養(yǎng)基。

  以上就是細(xì)胞株在培養(yǎng)過程中可能出現(xiàn)的問題、原因以及解決方法,希望可以幫助大家在培養(yǎng)細(xì)胞株過程中遇到的困難,僅供參考。

  5.細(xì)菌、酵母或真菌污染:將細(xì)胞和培養(yǎng)基滅菌處理后丟棄。

  四、細(xì)胞株凋亡

  培養(yǎng)箱中無CO2:監(jiān)測培養(yǎng)箱中CO2使用速度以便確定及時(shí)更換氣瓶;經(jīng)常檢測管路連接處是否漏氣;不要頻繁開啟培養(yǎng)箱門。

  2.培養(yǎng)箱內(nèi)溫度有波動(dòng):監(jiān)測培養(yǎng)箱內(nèi)溫度,及時(shí)校正。

  3.使用抗生素達(dá)到毒性濃度:減少抗生素的用量;使用無血清培養(yǎng)基時(shí),抗生素濃度應(yīng)降低至1/10。

  4.細(xì)胞株復(fù)蘇或凍存時(shí)受到損傷:取用新的細(xì)胞。

  5.培養(yǎng)基的滲透壓不合適:檢查wan全培養(yǎng)基的滲透壓。大多數(shù)哺乳動(dòng)物細(xì)胞可耐受260~350mOsm/kg的滲透壓,加入某些試劑和藥物后會(huì)影響培養(yǎng)基的滲透壓;昆蟲細(xì)胞培養(yǎng)基的滲透壓(340~380mOsm/kg)要高于哺乳動(dòng)物細(xì)胞。

  6.培養(yǎng)基中毒性代謝產(chǎn)物蓄積:去除原培養(yǎng)基,換用新鮮培養(yǎng)基。

  五、懸浮細(xì)胞株集成團(tuán)

  存在鈣離子和鎂離子:用不含鈣離子和鎂離子的平衡鹽溶液清洗細(xì)胞,輕輕吹打細(xì)胞,使其形成單細(xì)胞懸液。

  2.支原體污染:隔離細(xì)胞,檢測是否感染支原體;清洗通風(fēng)廚和培養(yǎng)箱,如細(xì)胞被污染,滅菌處理后丟棄。

  3.蛋白水解酶消化過度導(dǎo)致細(xì)胞裂解、DNA釋放:用0.001%DNA酶I處理細(xì)胞;用PBS沖洗后再接種到新培養(yǎng)基中。


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