手機版
化工儀器網(wǎng)手機版
化工儀器網(wǎng)小程序
官方微信
公眾號：chem17
掃碼關(guān)注視頻號
所有的固定方案必須做到：①防止抗原丟失；②透化細胞以便使抗體進入；③盡量使抗原保持能與抗體結(jié)合的狀態(tài)；④維持細胞正常結(jié)構(gòu)。
常用的固定劑種類很多，固定劑的正確選擇取決于被研究抗原的性質(zhì)及所用抗體的特性。固定劑可分為兩大類：有機溶劑和交聯(lián)劑。有機溶劑如乙醇和丙酮能夠去除脂類物質(zhì)使細胞脫水，把蛋白質(zhì)沉淀在細胞結(jié)構(gòu)上。交聯(lián)劑一般通過自由氨基基團把生物分子橋連起來，形成一個相互連接的抗原網(wǎng)。兩種方法均使蛋白質(zhì)抗原部分變性。因此，在細胞染色中，能夠識別變性蛋白的抗體更加有用。在某些情況下，只有用此類抗體才能得到滿意的結(jié)果。
往往憑經(jīng)驗選擇固定劑。雖然許多人發(fā)現(xiàn)用交聯(lián)劑固定細胞可以獲得較好的結(jié)果，但沒有通用規(guī)則可以參考?？梢栽囉脙煞N方法，然后選擇較好的一種。
懸浮細胞染色通常用于檢測細胞表面抗原。因為細胞呈懸浮狀態(tài)，洗滌過程復(fù)雜，因此，應(yīng)注意離心時間不要過長或轉(zhuǎn)速太高。
1．所需溶液
4％多聚甲醛(臨用前配制)、PBS。
2．操作步驟
(1)PBS配制4％多聚甲醛；
(2)用PBS洗滌細胞2次，用200g離心5min；重懸細胞。
(3)小心用4％多聚甲醛溶液懸浮細胞，細胞濃度約為1X106／m1 15min，間或搖動；
(4)200g離心5rain，用PBS重懸細胞，重復(fù)洗滌細胞2次；室溫下靜置
(5)用含0．2％TritonX-100或NP-40的PBS溶液透化細胞2min(室溫)，有的抗原需15min，具體時間視抗原而定；
(6)200g離心5rain，用PBS重懸細胞，重復(fù)洗滌細胞2次。
此時的細胞標(biāo)本可用于后續(xù)的抗體檢測。
相關(guān)產(chǎn)品
免責(zé)聲明
- 凡本網(wǎng)注明“來源：化工儀器網(wǎng)”的所有作品，均為浙江興旺寶明通網(wǎng)絡(luò)有限公司-化工儀器網(wǎng)合法擁有版權(quán)或有權(quán)使用的作品，未經(jīng)本網(wǎng)授權(quán)不得轉(zhuǎn)載、摘編或利用其它方式使用上述作品。已經(jīng)本網(wǎng)授權(quán)使用作品的，應(yīng)在授權(quán)范圍內(nèi)使用，并注明“來源：化工儀器網(wǎng)”。違反上述聲明者，本網(wǎng)將追究其相關(guān)法律責(zé)任。
- 本網(wǎng)轉(zhuǎn)載并注明自其他來源（非化工儀器網(wǎng)）的作品，目的在于傳遞更多信息，并不代表本網(wǎng)贊同其觀點和對其真實性負(fù)責(zé)，不承擔(dān)此類作品侵權(quán)行為的直接責(zé)任及連帶責(zé)任。其他媒體、網(wǎng)站或個人從本網(wǎng)轉(zhuǎn)載時，必須保留本網(wǎng)注明的作品第一來源，并自負(fù)版權(quán)等法律責(zé)任。
- 如涉及作品內(nèi)容、版權(quán)等問題，請在作品發(fā)表之日起一周內(nèi)與本網(wǎng)聯(lián)系，否則視為放棄相關(guān)權(quán)利。
采購中心