碧云天BL21 Star(DE3)超級感受態(tài)細(xì)胞(D1019S)現(xiàn)貨供應(yīng)
產(chǎn)品名稱:碧云天BL21 Star(DE3)超級感受態(tài)細(xì)胞(D1019S)現(xiàn)貨供應(yīng)
產(chǎn)品貨號:D1019S
產(chǎn)品品牌:碧云天
產(chǎn)品簡介:
碧云天BL21 Star(DE3)超級感受態(tài)細(xì)胞是一種可以用于將異源蛋白以超高水平表達(dá)的E. coli BL21 Star(DE3)即用型化學(xué)感受態(tài)細(xì)胞。使用pUC19質(zhì)粒進(jìn)行熱激活轉(zhuǎn)化,轉(zhuǎn)化效率可以高達(dá)1×108cfu/μg DNA以上。
E. coli細(xì)胞具有內(nèi)源性的mRNA降解小體,其中包含由rne131基因編碼的RNase E。BL21 Star(DE3)中rne131的基因突變,導(dǎo)致RNase E功能缺陷,增加了目的基因的mRNA穩(wěn)定性,表現(xiàn)為重組蛋白的超高得率。
使用說明:
1.解凍感受態(tài)細(xì)胞。取感受態(tài)細(xì)胞放置冰浴或冰水浴中融化,通常需要5分鐘以上的時間。解凍后須盡量在10分鐘內(nèi)使用,放置時間過長會影響轉(zhuǎn)化效率。
2.DNA樣品的轉(zhuǎn)化。取一管感受態(tài)細(xì)胞,加入DNA樣品,例如質(zhì)粒、連接產(chǎn)物或重組產(chǎn)物等,輕輕彈擊管底約2-3次或輕輕晃動約2-3次以混勻,立即冰浴靜置30分鐘。
注:所用DNA體積通常不宜超過感受態(tài)細(xì)胞體積的10%,混合時不得使用移液器進(jìn)行吹打。如果用于質(zhì)粒的轉(zhuǎn)化擴(kuò)增,冰浴靜置約10分鐘,后續(xù)可以直接涂板并培養(yǎng)過夜;如果用于連接產(chǎn)物或重組產(chǎn)物的轉(zhuǎn)化,建議冰浴靜置30分鐘并嚴(yán)格執(zhí)行后續(xù)的熱激處理和復(fù)蘇培養(yǎng)等步驟,以提高轉(zhuǎn)化效率。
3.熱激處理。將冰浴放置的離心管快速置于42℃水浴中,靜置熱激45秒。隨后立即轉(zhuǎn)移至冰水浴中靜置2分鐘以快速冷卻至接近零度。熱激及轉(zhuǎn)移至冰浴過程中切勿晃動離心管。
4.復(fù)蘇培養(yǎng)。加入900μl不含抗生素的LB培養(yǎng)基,顛倒數(shù)次混勻,37℃搖床約150rpm復(fù)蘇培養(yǎng)1小時。如果用于質(zhì)粒的轉(zhuǎn)化擴(kuò)增,復(fù)蘇培養(yǎng)10-20分鐘也wan全足夠了;如果用于連接產(chǎn)物或重組產(chǎn)物的轉(zhuǎn)化,建議嚴(yán)格進(jìn)行復(fù)蘇培養(yǎng)操作。
5.收菌涂板。約5000×g室溫離心1分鐘,沉淀細(xì)菌,吸除約900-950μl上清,余下約50-100μl上清。用移液器輕輕吹打并重懸菌體,隨后涂布到含相應(yīng)抗生素的LB平板上。
注:如果用于質(zhì)粒的轉(zhuǎn)化擴(kuò)增,可以僅取少量進(jìn)行涂板;如果用于連接產(chǎn)物或重組產(chǎn)物的轉(zhuǎn)化,建議取所有重懸的菌液涂板。
6.將平板倒置放于37℃培養(yǎng)箱培養(yǎng)過夜。
產(chǎn)品選購:
貨號 | 產(chǎn)品名稱 | 規(guī)格 |
D1019S | BL21 Star(DE3)超級感受態(tài)細(xì)胞 | 10×100μl 50×100μl |
北京百奧創(chuàng)新科技有限公司現(xiàn)貨供應(yīng)碧云天BL21 Star(DE3)超級感受態(tài)細(xì)胞(D1019S),歡迎選購!
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