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牛血清蛋白的測定方法以及用途

來源:上海一基實業(yè)有限公司   2024年04月24日 09:38  

牛血清白蛋白的相對分子質(zhì)量為10的4次方這個級別,它不是一定的,而是多聚物的,有的地方測試牛血清白蛋白分子式數(shù)據(jù)為70 000,這一數(shù)據(jù)是在做PCR的時候使用的數(shù)據(jù)。

牛血清白蛋白是血液中的主要成分(38g/100ml),分子量68kD,等電點4.8,含氮量16%,含糖量0.08%,僅含已糖和已糖胺,含脂量只有0.2%。白蛋白由581個氨基酸殘基組成,其中35個半胱氨酸組成17個二硫鍵,在肽鏈的第34位有一自由巰基。白蛋白可與多種陽離子、陰離子和其他小分子物質(zhì)結(jié)合。牛血清蛋白溶液可以作為測量蛋白質(zhì)含量的標(biāo)準(zhǔn)曲線用。

一般買回來的牛血清蛋白是細(xì)小片狀的乳白色粉末。牛的血清蛋白也以鐵為基本原料。

用途
1、特純級牛血清蛋白
用途:用作酶標(biāo)、金標(biāo)等診斷試劑的封閉劑,生化試驗等。
電場対超感牛血清白蛋白截留率的影響
性狀:淡黃色干燥粉末

2、無脂肪酸牛血清蛋白
用途:用作酶標(biāo)、金標(biāo)等診斷試劑的封閉劑、保護劑,尤其適用于容易受脂肪酸影響的產(chǎn)品和試驗。
性狀:淡黃色干燥粉末

3、無蛋白酶牛血清蛋白
用途:用于酶標(biāo)、金標(biāo)等診斷試劑的封閉劑、保護劑,尤其適合血液脂類的診斷試驗、脂類診斷試劑及對純度要求高的產(chǎn)品。
性狀:淡黃色干燥粉末

4、細(xì)胞培養(yǎng)級牛血清蛋白
用途:無血清培養(yǎng)基的蛋白添加劑,供細(xì)胞培養(yǎng)使用。
性狀:淡黃色干燥粉末白蛋白

測定
標(biāo)準(zhǔn)曲線
一般用分光光度法測物質(zhì)的含量,先要制作標(biāo)準(zhǔn)曲線,然后根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線查出所測物質(zhì)的含量。因此,制作標(biāo)準(zhǔn)曲線是生物檢測分析的一項基本技術(shù)  。

測定方法
1. 凱氏定氮法
2. 雙縮脲法
3. Folin-酚試劑法
4. 紫外吸收法
5. 考馬斯亮藍法

試劑
1. 考馬斯亮藍試劑:
考馬斯亮藍G—250 100mg溶于50ml 95%乙醇,加入100ml 85% H3PO4,用蒸餾水稀釋至1000ml,濾紙過濾。zui終試劑中含0.01%(W/V)考馬斯亮藍G—250,4.7%(W/V)乙醇,8.5%(W/V)H3PO4。
2. 標(biāo)準(zhǔn)蛋白質(zhì)溶液:
純的牛血清血蛋白,預(yù)先經(jīng)微量凱氏定氮法測定蛋白氮含量,根據(jù)其純度同0.15mol/LNaCl配制成100ug/ml蛋白溶液。

器材
1. 722S型分光光度計使用及原理。
2. 移液管使用。

制作步驟
試管編號 0 1 2 3 4 5 6
100ug/ml標(biāo)準(zhǔn)蛋白(ml) 0.0 0.1 0.2 0.3 0.4 0.5 0.6
0.15mol/L NaCl (ml) 1 0.9 0.8 0.7 0.6 0.5 0.4
考馬斯亮藍試劑 (ml) 5 5 5 5 5 5 5
搖勻,1h內(nèi)以1號管為空白對照,在595nm處比色

3、以A595nm為縱坐標(biāo),標(biāo)準(zhǔn)蛋白含量為橫坐標(biāo)(六個點為10ug、20 ug、30 ug、40 ug、50 ug、60 ug),在坐標(biāo)軸上繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。
(1)、利用標(biāo)準(zhǔn)曲線查出回歸方程。
(2)、用公式計算回歸方程。
(3)、或用origin作圖 ,測出回歸線性方程。即A595nm=a×X( )+6
一般相關(guān)系數(shù)應(yīng)過0.999以上,至少2個9以上。
(4)、繪圖時近兩使點在一條直線上,在直線上的點應(yīng)該在直線兩側(cè)。

含量的測定
樣品即所測蛋白質(zhì)含量樣品(含量應(yīng)處理在所測范圍內(nèi)),依照操作步驟1操作,測出樣品的A595nm,然后利用標(biāo)準(zhǔn)曲線或回歸方程求出樣品蛋白質(zhì)含量。
一般被測樣品的A595nm值在0.1—0.05之間,所以上述樣品如果A595nm值太大,可以稀釋后再測A595nm值,然后再計算。

注意事項
1. 玻璃儀器要洗滌干凈。
2. 取量要準(zhǔn)確。
3. 玻璃儀器要干燥,避免溫度變化。
4. 對照:用被測物質(zhì)以外的物質(zhì)作空白對照

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