膠原酶儲存液的配制:
向每管100mg的膠原酶中加入100µL的含Ca2+、Mg2+的HBSS(Hank’s平衡鹽溶液,含Ca2+、Mg2+),輕輕旋渦震蕩使其充分溶解,制備成1g/ml(即1000×)的儲存液。
然后用低蛋白結(jié)合性的0.22μm的濾膜過濾除菌,分裝成小份量,然后于-20℃避光凍存。
使用前于冰上解凍,避免反復(fù)凍融。
膠原酶工作液的配制:
根據(jù)需要的濃度,將膠原酶I型溶解在適當(dāng)?shù)娜軇┲校鏒MEM或PBS。
對于I型膠原酶,一般使用濃度為0.075%至0.1%。
如果使用DMEM作為溶劑,可以按照以下步驟操作:
約5ml DMEM加入膠原酶的玻璃瓶中,吹打使其溶解,移入50ml離心管。
補(bǔ)DMEM至36ml,再加入4ml FBS,混勻。
然后分裝每10ml一管,于-20度保存。
如果用于脂肪消化,可以使用以下濃度和步驟:
計(jì)算所需的酶量,例如0.75mg/ml PBS。
準(zhǔn)確稱取所需量的膠原酶,加PBS溶解。
搖勻后,通過濾器過濾,即可使用。
在37度下消化30-40分鐘。
注意:具體的配置方法可能會根據(jù)實(shí)驗(yàn)需求和所使用的膠原酶I型產(chǎn)品的說明進(jìn)行調(diào)整。
在使用前,應(yīng)仔細(xì)閱讀產(chǎn)品說明書,并遵循制造商的建議進(jìn)行操作。
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