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細(xì)胞線粒體分離試劑盒使用說明!

來源:上海一基實(shí)業(yè)有限公司   2024年05月08日 09:06  

細(xì)胞線粒體分離試劑盒使用說明!

線粒體是細(xì)胞呼吸的主要場(chǎng)所,細(xì)胞活動(dòng)所需的能量主要由在線粒體內(nèi)進(jìn)行的氧化所產(chǎn)生的能量來供應(yīng)。制備線粒體的關(guān)鍵是保持線粒體的完整性和純度,可通過分級(jí)分離法獲得,即先低俗出去細(xì)胞核以及細(xì)胞碎片,再進(jìn)行高速梯度離心分離線粒體。

產(chǎn)品名稱:細(xì)胞線粒體分離試劑盒

產(chǎn)品規(guī)格:50T

儲(chǔ)存條件:-20℃,12個(gè)月

產(chǎn)品組成:試劑(A): Mitochondria Lysis buffer     試劑(B): Wash buffer     試劑(C): Mitochondria Stock buffer   

                 試劑(D): Protein Stock buffer(5×)       試劑(E): PMSF(100×)

細(xì)胞線粒體分離試劑盒(Cell Mitochondria Isolation Kit)是快速便捷分離培養(yǎng)細(xì)胞中的線粒體的試劑盒,分離線粒體的同時(shí)可以獲得去除線粒體的細(xì)胞漿蛋白,可用于分析細(xì)胞 色素 C等線粒體蛋白向胞漿的釋放,大部分獲得的線粒體都含有完整的內(nèi)膜和外膜,并具有線粒體的生理功能(如檢測(cè)線粒體膜電位),獲得的蛋白可用于SDS-PAGE、Western、雙向電泳等蛋白分析。

實(shí)驗(yàn)步驟{僅供參考)

1、清洗:用預(yù)冷的PBS清洗細(xì)胞1次,4°C1000g離心5min,棄上清。

2、裂解:沉淀用1~2ml預(yù)冷的Mitochondria Lysis buffer重懸細(xì)胞,冰浴放置10~15min,可用相差顯微鏡檢測(cè)膨脹的程度。

3、勻漿:把細(xì)胞懸液轉(zhuǎn)移至Dounce勻漿器中,勻漿10~20次。不同細(xì)胞或不同勻漿器所需的勻漿次數(shù)有所不同,需自行優(yōu)化。

4. 取勻漿液,立即加入等量Wash buffer,輕輕顛倒混勻數(shù)次取勻漿液,立即加入等量Wash buffer,輕輕顛倒混勻數(shù)次取勻漿液,立即加入等量Wash buffer,輕輕顛倒混勻數(shù)次取勻漿液,立即加入等量Wash buffer,輕輕顛倒混勻數(shù)次

5、4°C1300g離心5min以去除細(xì)胞核、未破碎的細(xì)胞和大的膜碎片。

6、上清液轉(zhuǎn)移至一干凈離心管,4°C1000g離心5min,重復(fù)2次。

7、上清液轉(zhuǎn)移至一干凈離心管,4°C12000~15000g離心15min,重復(fù)1次。

8、棄上清,沉淀為線粒體。如果希望獲得去除線粒體的細(xì)胞漿蛋白,應(yīng)在本步驟中收集上清,并且在收集上清時(shí)注意勿觸及沉淀,隨后把收集的上清12000g4°C離心10min,上清即為去除線粒體的細(xì)胞漿蛋白。

9、保存:棄上清,用適當(dāng)緩沖液懸浮沉淀。如果用于線粒體酶活性或功能的分析,線粒體沉淀應(yīng)重懸于Mitochondria Stock buffer;如果用于細(xì)胞漿蛋白的分析,獲得的細(xì)胞漿蛋白應(yīng)保存于1×Protein Stock buffer,即按細(xì)胞漿蛋白:Protein Stock buffer (5×)=4:1比例混合;如果用于雙向電泳,應(yīng)使用恰當(dāng)?shù)谋4嬉骸?/p>

本產(chǎn)品僅供科研實(shí)驗(yàn)用,不做其它用途!


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