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ELISA法的免疫反應(yīng)部分中，抗原-抗體的親和力、抗原和半抗原的性質(zhì)、測定方法的實驗條件、酶標(biāo)記物的性質(zhì)等因素均會影響反應(yīng)的敏感性。在酶學(xué)反應(yīng)部分中，酶的濃度、底物的濃度、反應(yīng)pH、溫度、酶的抑制劑和激活劑等因素也影響反應(yīng)的敏感性。下面讓我們一起來看看ELISA實驗的注意事項吧！
需要注意以下幾點：
(1)待測樣品溶液中不能存在與標(biāo)記酶相同的酶、底物、酶抑制劑和其他干擾因素，以防止干擾作用。
(2)聚苯乙烯反應(yīng)板測定時，溶液宜垂直滴入凹孔中間，相繼加入的溶液都覆蓋相同的載體表面積。在吸附、溫育和洗滌等操作中應(yīng)避免劇烈震搖、攪拌等，以保證恒定的吸附容量。在洗滌操作中，由于聚苯乙烯反應(yīng)板凹孔容量小、孔間距離近，故洗滌時要注意每次加入的洗滌液量既要達到洗滌充分又要避免相鄰孔內(nèi)液體互相污染。
(3)在ELISA中血清陰性對照的顯色反應(yīng)常常是因酶結(jié)合物與固相之間的非特異性吸附所致，可在酶結(jié)合物稀釋時中加入去污劑(如Tween-20)或非特異性蛋白質(zhì)(牛血清白蛋白)，減少酶結(jié)合物的非特異性吸附作用。稀釋的酶結(jié)合物置于室溫條件下過久，會影響底物的顯色反應(yīng)，所以酶結(jié)合物應(yīng)在使用前稀釋。
(4)一些底物如OPD和TMB在暗處穩(wěn)定，底物溶液要現(xiàn)用現(xiàn)配，酶促反應(yīng)時注意避光。某些含苯環(huán)的底物有致畸變作用或致癌作用，使用時要多加小心，測定完數(shù)據(jù)后，收集反應(yīng)溶液，集中處理，不要流入下水道。
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