介紹

近期，浙江大學(xué)醫(yī)學(xué)院傳染病診治國家重點實驗室刁宏燕老師課題組于2024年3月24 日發(fā)表在Molecular Cancer Research (IF:5.2)上題為“Hepatitis B Virus-mediated m6A demethylation increases hepatocellular carcinoma stemness and immune escape”的文章，借助肝細(xì)胞癌模型(HCC)及多種技術(shù)揭示了HBV通過在ALKBH5-YTHDF2依賴的條件下提高SNAI2的m6A修飾，促進(jìn)HCC干細(xì)胞樣表型的維持，并增加免疫檢查點受體CD155的表達(dá)。

摘要

乙型肝炎病毒(HBV)持續(xù)感染在肝細(xì)胞癌(HCC)腫瘤發(fā)生中起著重要作用。許多研究揭示了多種癌癥中N6-甲基腺苷(m6A)的關(guān)鍵作用，而HBV持續(xù)感染相關(guān)HCC中m6A的調(diào)節(jié)機(jī)制尚未闡明。在這里，課題組通過增強(qiáng)ALKBH5 mRNA的穩(wěn)定性，證明HBV在HBV陽性HCC中下調(diào)m6A修飾水平。更具體地說，課題組還發(fā)現(xiàn)ALKBH5 mRNA在HBV陽性HCC的干細(xì)胞維持和自我更新中是必需的，但在HBV陰性HCC中是不必要的。機(jī)制上，ALKBH5去除了SNAI2基因30個未翻譯區(qū)(UTR)的m6A修飾，防止YTHDF2在那里被識別，從而穩(wěn)定SNAI2轉(zhuǎn)錄本，從而促進(jìn)HBV陽性HCC中的癌干細(xì)胞特性。此外，SNAI2的表達(dá)逆轉(zhuǎn)了降低ALKBH5后抑制干細(xì)胞特性的作用。此外，ALKBH5/SNAI2軸通過激活免疫檢查點受體CD155來加速腫瘤免疫逃避。課題組的研究揭示了ALKBH5作為HBV相關(guān)HCC的關(guān)鍵調(diào)節(jié)因子，能夠誘導(dǎo)SNAI2的m6A去甲基化，并鑒定了ALKBH5/SNAI2/YTHDF2軸在HBV感染過程中促進(jìn)干細(xì)胞樣表型和免疫逃逸的功能。

材料和方法

細(xì)胞培養(yǎng)和組織標(biāo)本獲取(HCC cells、Mouse Hepa1-6 cell line、NK-92MI cells)、PDX造模(HepG2.215 cells 和Hep3B cells)、Western blot分析、腫瘤球培養(yǎng)、多重免疫組化和定量分析、肝細(xì)胞癌類器官構(gòu)建(HCC)、MeRIP-seq數(shù)據(jù)分析、NK-92MI細(xì)胞殺傷實驗、IHC和評分、統(tǒng)計分析。

結(jié)果

1、hbv陽性HCC細(xì)胞中m6A水平降低可增強(qiáng)干性維持

2、HBV增強(qiáng)ALKBH5 mRNA穩(wěn)定性，促進(jìn)干細(xì)胞樣特性

3、在hbv陽性HCC中，ALKBH5是維持肝癌細(xì)胞自我更新所必需的因素

4、SNAI2是hbv陽性HCC中ALKBH5功能上重要的靶基因

5、30 UTR中alkbh5介導(dǎo)的m6A去甲基化通過ythdf2依賴途徑穩(wěn)定SNAI2 mRNA水平

6、SLUG參與alkbh5調(diào)控的hbv相關(guān)HCC的干細(xì)胞樣特性

7、LKBH5/SNAI2軸通過調(diào)節(jié)CD155促進(jìn)腫瘤免疫逃避

結(jié)論

總的來說，課題組的結(jié)果顯示ALKBH5與SNAI2的轉(zhuǎn)錄物3^'UTR互作進(jìn)一步去甲基化m6A修飾，增強(qiáng)了SNAI2的穩(wěn)定性以維持其高表達(dá)和促進(jìn)HBV相關(guān)HCC的干性維持和免疫逃逸。精確靶向ALKBH5的表達(dá)對hbv相關(guān)HCC的治療是至關(guān)重要的方法。

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