跨膜蛋白是嵌入細(xì)胞膜磷脂雙分子層中實現(xiàn)細(xì)胞內(nèi)外跨越的一類蛋白，是細(xì)胞膜的重要組成部分。在物質(zhì)運輸、信號轉(zhuǎn)導(dǎo)和細(xì)胞間識別等多種細(xì)胞功能中發(fā)揮著重要作用。人類的許多疾病都與這些膜蛋白功能異常有關(guān)，因此它們成為理想的藥物作用靶點。目前以跨膜蛋白為藥物靶點占現(xiàn)階段己知藥物靶點的60%以上。而針對抗體藥靶點，膜蛋白幾乎占90%以上。以跨膜蛋白為靶點的創(chuàng)新藥研發(fā)一直是醫(yī)藥領(lǐng)域的研究熱點。

抗原制備是研發(fā)抗體藥候選分子的首要問題，然而體外制備有活性的跨膜蛋白是技術(shù)難題。跨膜蛋白制備難點：

具有全長完整結(jié)構(gòu)的多次跨膜蛋白在藥物研發(fā)中具有重要意義。為助力跨膜蛋白靶點藥物的開發(fā)，翌圣生物開發(fā)出基于哺乳細(xì)胞的病毒樣顆粒（VLPs）表達(dá)跨膜蛋白技術(shù)平臺,該技術(shù)平臺所制備的多次跨膜蛋白，具備完整的生物活性。

  VLPs（Virus-Like Particles）是由多個病毒的一種或者多種衣殼蛋白自動組裝形成的納米級別的微小顆粒。VLPs顆粒不含病毒核酸，不能進(jìn)行自主復(fù)制，安全性高，具有與病毒顆粒類似的整體結(jié)構(gòu)。細(xì)胞在感染病毒后會從細(xì)胞膜表面通過一種類似細(xì)胞膜出芽的方式分泌100-300nm左右的納米膜顆粒，包膜VLP可通過這種“出芽”的方式帶走含有目的蛋白的細(xì)胞膜，從而獲得可溶形式的多次跨膜蛋白。

VLP技術(shù)平臺可以通過各種宿主細(xì)胞系統(tǒng)生產(chǎn)，如昆蟲細(xì)胞、哺乳動物細(xì)胞和植物細(xì)胞。與昆蟲和植物細(xì)胞系統(tǒng)相比，哺乳動物細(xì)胞表達(dá)系統(tǒng)更接近人類細(xì)胞的生理環(huán)境，因此在蛋白質(zhì)翻譯、修飾和折疊方面具有更高的保真度。YEASEN基于哺乳動物細(xì)胞表達(dá)系統(tǒng)的VLP技術(shù)平臺改進(jìn)了生產(chǎn)工藝，可以顯著提高表達(dá)水平，降低細(xì)胞毒性。

翌圣生物搭建了基于HEK293表達(dá)系統(tǒng)的包膜VLP技術(shù)平臺，能夠?qū)⒛康哪さ鞍淄暾故驹赩LP表面，使這些復(fù)雜的膜蛋白轉(zhuǎn)變?yōu)榭扇苄缘摹⒏邼舛鹊牡鞍子糜诳贵w免疫和篩選。YEASEN已成功開發(fā)出一系列VLP全長多次跨膜蛋白產(chǎn)品,包括Claudin 18.2、GPRC5D、CCR8、CD20及CLDN18.1等多個熱門靶點。

圖1.VLP展示目標(biāo)蛋白的過程

平臺優(yōu)勢

（1）ELISA驗證Human Claudin18.2生物活性

Figure 2. Immobilized Human CLDN18.2 VLP at 5 ug/mL (30 uL/well) can bind IMAB362. The EC50 was approximately 0.008401 μg/ml.

（2）ELISA驗證Human GPRC5D生物活性

Figure 3. Immobilized Human GPRC5D VLP at 5 ug/mL (30 uL/well) can bind Monoclonal Anti-Human GPRC5D antibody, The EC50 was approximately 0.006247 ug/ml.

（3）DLS驗證Human A2AR純度

Figure 4. The mean peak Radius of VLP is 117.7 nm with more than 95% intensity as determined by DLS（dynamic light scattering）.

（4）ELISA 驗證Human CD20 生物活性

Figure 5. Immobilized Human CD20 VLP at 5 ug/mL (30 ul/well) can bind obinutuzumab(P214063), The EC50 was approximately 0.006752 μg/ml.

Figure 6. Immobilized Human CD20 VLP at 5 ug/mL (30 ul/well) can bind Anti-CD20 / MS4A1 Reference Antibody (divozilimab), The EC50 was approximately 0.01698 μg/ml.