人ELISA試劑盒實(shí)驗(yàn)操作中，須特別注意細(xì)節(jié)問題，細(xì)節(jié)往往決定著試驗(yàn)的成功與否。關(guān)于ELISA試劑盒的實(shí)驗(yàn)操作，這些細(xì)節(jié)很重要：

1、吸取液體時(shí)速度不易太快，以免產(chǎn)生氣泡，人ELISA試劑盒吸取的量不夠準(zhǔn)確。

2、吸取液體時(shí)要選用量程和需要量接近的微量加樣器吸，減少誤差。

3、加酶試劑后用吸水紙?jiān)诿笜?biāo)板表面輕拭吸干。

4、合理安排檢測量，以免反應(yīng)板過多造成洗板等待時(shí)間長。

5、吸取液體時(shí)，要用量程和需要量接近的槍去吸，減少誤差。

6、未使用完的酶標(biāo)板或者試劑，請(qǐng)于2-8℃保存。辣根過氧化物酶標(biāo)記抗人IgG工作液請(qǐng)依據(jù)所需的量配置使用。請(qǐng)勿重復(fù)使用已稀釋過的辣根過氧化物酶標(biāo)記抗人IgG工作液。

7、要盡量做雙孔實(shí)驗(yàn)，這樣才既能保證數(shù)據(jù)的準(zhǔn)確性，又能反映出試劑盒的精密度。

8、每次實(shí)驗(yàn)留一孔作為空白調(diào)零孔，該孔不加任何試劑，只是最后加底物溶液及2N H2SO4。測量時(shí)先用此孔調(diào)OD值至零。

9、手工洗板時(shí)每次加入洗滌液后。應(yīng)靜置15～30s，不要將一個(gè)酶標(biāo)孑L中的洗滌液濺入另一酶標(biāo)孔中，防止交叉污染。甩去洗滌液后將酶標(biāo)板放在毛巾或吸水紙上拍干。

10、樣品稀釋液應(yīng)用加液器加注，并經(jīng)常校對(duì)其準(zhǔn)確性。

11、為防止樣品蒸發(fā)，試驗(yàn)時(shí)將反應(yīng)板放于鋪有濕布的密閉盒內(nèi)，酶標(biāo)板加上蓋或覆膜。

12、ELISA試劑盒實(shí)驗(yàn)中，加樣后及時(shí)放人孵箱，標(biāo)本較多時(shí)，要分批操作。按說明步驟嚴(yán)格控制操作時(shí)間，防止孵育時(shí)間人為延長，導(dǎo)致非特異性結(jié)合緊附于反應(yīng)孔周圍，難以清洗che底。

13、剩余樣品及廢棄物應(yīng)經(jīng)121℃高壓蒸汽滅菌30分鐘，或用5.0g/L次氯酸鈉等消毒劑處理30分鐘后廢棄。

14、對(duì)樣本的結(jié)果有疑問時(shí)需要使用其他檢測方法進(jìn)行驗(yàn)證。

15、沒有去離子水或雙蒸水時(shí)，可以使用娃哈哈純凈水配制溶液，切勿使用自來水。

16、在使用微量加樣器時(shí)，吸取不同瓶子中液體后要更換槍頭，即使吸取標(biāo)準(zhǔn)品溶液。

17、人ELISA試劑盒洗滌時(shí)各孔均需加滿液體，防止孔口有游離酶不能洗凈。