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MC1000 8 通道藻類培養(yǎng)與在線監(jiān)測系統(tǒng)應(yīng)用案例

來源:北京易科泰生態(tài)技術(shù)有限公司   2024年05月30日 09:32  

MC1000 8通道藻類培養(yǎng)與在線監(jiān)測系統(tǒng),是由8100ml藻類培養(yǎng)試管、水浴控溫系統(tǒng)、多色LEDs光源控制系統(tǒng)及光密度和溶解氧(選配)在線監(jiān)測系統(tǒng)等組成的專業(yè)藻類培養(yǎng)設(shè)備,可用于藻類培養(yǎng)與控制實驗、梯度對比實驗等,適于碳同化研究、水體生態(tài)毒理學(xué)研究檢測、藻類生理生態(tài)研究、水生態(tài)研究等。

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案例一:通過遺傳和環(huán)境協(xié)同擾動手段獲得耐高溫高光藍(lán)突變體

光合作用是地球上最重要的生化過程之一,但高光和高溫(HLHT)脅迫會損害光合作用的效率。提高光自養(yǎng)生物對HLHT的耐受性對于農(nóng)業(yè)和其他依賴光合作用的經(jīng)濟活動至關(guān)重要。然而目前獲得耐HLHT光自養(yǎng)生物費費力,其潛在的分子機制也暫不明確。

在中國科學(xué)院青島生物能源與過程研究所的一項研究中,開發(fā)了一套高突變系統(tǒng),通過基因遺傳保真元件敲除、誘變元件表達(dá)的策略,結(jié)合高溫高光培養(yǎng),將藍(lán)藻的突變率提高了三個數(shù)量級。利用這個高突變系統(tǒng),研究人員快速獲得了HLHT耐受能力顯著提高的突變藻株,并揭示影響藍(lán)HLHT耐受能力的關(guān)鍵靶點與功能機制。

其中,高突變系統(tǒng)的高溫高光環(huán)境,即為MC1000多通道藻類培養(yǎng)與在線監(jiān)測系統(tǒng)提供,研究中使用MC1000設(shè)置不同的溫度光強條件給聚球藻施加環(huán)境壓力,觸發(fā)聚球藻高突變狀態(tài)。另外,藻的預(yù)培養(yǎng)、相對突變率評估、分離出的突變藻株培養(yǎng)、耐高溫高光評估等,也均在MC1000中設(shè)定相應(yīng)培養(yǎng)條件進(jìn)行。易科泰為中科院能源所提供了多套不同配置的MC1000,這些設(shè)備也在為研究人員的多種實驗不斷工作著。

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案例二:輻照度和無機碳利用率對長柄聚球菌PCC 7942異源蔗糖產(chǎn)量的影響

蔗糖是生物乙醇的重要原料,也是許多高附加值化學(xué)品的有前景的基石植物是蔗糖的主要來源,但由于耕地和水資源利用倫理問題等原因,尋找另一種蔗糖來源以替代植物十分必要。藍(lán)藻細(xì)菌已被認(rèn)為是一種潛在的碳水化合物原料,多種物種已被成功地設(shè)計分泌,但不同模式物種之間,蔗糖生產(chǎn)力存在相當(dāng)大的差異。研究案例中,不同的實驗室設(shè)備和生長條件(特別是光照、CO2和培養(yǎng)器類型)如何影響藍(lán)藻的蔗糖生產(chǎn)進(jìn)行了系統(tǒng)評估。

其中,便利用MC1000進(jìn)行了藍(lán)藻光耐受性和蔗糖生產(chǎn)力評估,使用的藍(lán)藻為蔗糖滲透酶 (cscB)和蔗糖磷酸合酶(sps)表達(dá)的特定藻株S. elongatus。實驗中,將培養(yǎng)溫度設(shè)定為32℃,通3CO2氣體,分別用150,250,500,1000,2000μmol/m2/s光強(冷白光)培養(yǎng),在0,24h,48h,72h分別檢測藻液的OD750及蔗糖含量。

結(jié)果可知,野生型(WT)和不生產(chǎn)蔗糖的藻株(non-exporting cscB/spsOD750在幾個光強下均可以達(dá)到2.2,而S. elongatusOD750則較低,這是因為它將固定的碳更多的用來生產(chǎn)蔗糖,導(dǎo)致其細(xì)胞生長受限,生物量下降。用于藍(lán)藻培養(yǎng)的輻照度與蔗糖生產(chǎn)力之間存在直接關(guān)系,500μmol/m2/s時達(dá)到最大,而當(dāng)光強超過這個閾值,其蔗糖產(chǎn)量則開始下降。

但在進(jìn)一步的實驗中,將藻株的初始接種濃度提高,使用20002500μmol/m2/s光強培養(yǎng),其蔗糖產(chǎn)量則有所上升,高光強度被S. elongatus耐受,特別是在高密度培養(yǎng)下,可能是其濁度減弱培養(yǎng)物中透過的有效光照。正是MC1000高光強、多通道的配置為實驗提供了培養(yǎng)和檢測條件。

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案例二:碳通量調(diào)節(jié)蛋白pirC對工程藍(lán)藻乙醇生產(chǎn)的影響

由于人類活動導(dǎo)致的大氣中CO2濃度上升是全球氣候變化的主要因素之一。為了減少對化石碳源的依賴,需要尋找可持續(xù)的CO2利用過程,如利用光合自養(yǎng)微生物(例如藍(lán)碳同化途徑進(jìn)行生物質(zhì)的生成。藍(lán)藻作為可持續(xù)生物經(jīng)濟的有前景的工程底盤,但目前菌株通常生產(chǎn)力較低,工業(yè)應(yīng)用受限。通過基因工程改造藍(lán)細(xì)菌,可以提高其生產(chǎn)乙醇等有價值產(chǎn)品的效率,從而為可持續(xù)能源生產(chǎn)提供新的可能性。

本研究案例使用了改造后的藍(lán)藻Synechocystis sp. PCC 6803,該藍(lán)藻通過表達(dá)來自Zymomonas mobilis的丙酮酸脫羧酶(PDC)和來自Synechocystis sp. PCC 6803的乙醇脫氫酶(ADH)來產(chǎn)生乙醇。通過敲除調(diào)節(jié)蛋白pirC的基因,在不同的氮或碳條件下培養(yǎng)株,并分析乙醇產(chǎn)量,研究pirC對乙醇產(chǎn)量的影響。

乙醇生產(chǎn)實驗在MC1000中進(jìn)行,培養(yǎng)過程中使用MC1000連續(xù)自動測量720nm光密度(OD720),并在第03、57天采樣手動測定OD720。培養(yǎng)過程中,排出的氣體流入收集瓶,量化了培養(yǎng)容器造成的揮發(fā)性乙醇的損失。在培養(yǎng)物的第3、5、7天提取乙醇定量樣品。第7天進(jìn)行代謝物定量。

 

結(jié)果發(fā)現(xiàn),藻株生長速率和乙醇產(chǎn)量之間存在明顯的相關(guān)性。經(jīng)過之后更多實驗證明,pirC的突變在氮耗竭條件下對乙醇生產(chǎn)有積極影響。乙醇產(chǎn)量的增加伴隨著丙酮酸水平的升高和糖原水平的降低,表明pirC的缺失確實增加了碳向較低糖酵解途徑的分配。

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參考文獻(xiàn):

[1] Sun H, Luan G, Ma Y, et al. Engineered hypermutation adapts cyanobacterial photosynthesis to combined high light and high temperature stress[J]. Nature Communications, 2023, 14(1): 1238.

[2] Yun L, Zegarac R, Ducat D C. Impact of irradiance and inorganic carbon availability on heterologous sucrose production in Synechococcus elongatus PCC 7942[J]. Frontiers in Plant Science, 2024, 15: 1378573.

[3] B?hm J, Kauss K, Michl K, et al. Impact of the carbon flux regulator protein pirC on ethanol production in engineered cyanobacteria[J]. Frontiers in Microbiology, 2023, 14: 1238737.

 

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