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制備液相色譜中的流動(dòng)相設(shè)計(jì)與調(diào)整

來(lái)源:依利特(大連)分析儀器有限公司   2024年06月06日 14:00  
   制備液相色譜中的流動(dòng)相設(shè)計(jì)與調(diào)整是確保實(shí)驗(yàn)成功和獲得準(zhǔn)確數(shù)據(jù)的關(guān)鍵步驟。以下是對(duì)流動(dòng)相設(shè)計(jì)與調(diào)整的詳細(xì)解釋,包括分點(diǎn)表示和歸納,以及參考文章中的相關(guān)數(shù)字和信息:
  一、流動(dòng)相配置注意事項(xiàng)
  混合方式:
  流動(dòng)相的混合通常按照體積比(V/V)進(jìn)行,因?yàn)槿芤旱捏w積隨溫度變化而變化,按重量比混合雖然重復(fù)性較好但操作繁瑣。
  例如,配置50%乙腈水溶液時(shí),可以直接量取乙腈500ml和水500ml,然后充分混合。
  試劑要求:
  高效液相色譜儀對(duì)試劑的純度有嚴(yán)格要求,如甲醇、乙腈等必須為色譜級(jí)純。
  水應(yīng)為超純水或購(gòu)買質(zhì)量有保證的純凈水。
 

制備液相色譜

 

  二、流動(dòng)相設(shè)計(jì)與調(diào)整原則
  由強(qiáng)到弱:
  一般先用極性強(qiáng)的90%的乙腈(或甲醇)/水(或緩沖溶液)進(jìn)行試驗(yàn),根據(jù)出峰情況調(diào)整有機(jī)溶劑的比例。
  三倍規(guī)則:
  每減少10%的有機(jī)溶劑(甲醇或乙腈)的量,保留因子約增加3倍。這是一個(gè)省力且有效的調(diào)整方法。
  粗調(diào)轉(zhuǎn)微調(diào):
  當(dāng)分離達(dá)到一定程度時(shí),應(yīng)將有機(jī)溶劑10%的改變量調(diào)整為5%,并逐漸降低調(diào)整率,直至各組分的分離情況不再改變。
  三、流動(dòng)相pH值的調(diào)整
  弱酸樣品:
  流動(dòng)相的pH值越小,組分的k值越大。當(dāng)pH值遠(yuǎn)低于弱酸的pKa值時(shí),弱酸主要以分子形式存在。
  分析弱酸樣品時(shí),通常在流動(dòng)相中加入少量的弱酸,如50mmol/L磷酸鹽緩沖液和1%醋酸溶液。
  弱堿樣品:
  對(duì)于弱堿樣品,情況相反。分析時(shí)通常在流動(dòng)相中加入少量的弱堿,如50mmol/L磷酸鹽緩沖液和30mmol/L三乙胺溶液。
  四、含緩沖鹽流動(dòng)相的配制
  配置緩沖鹽使用的鹽試劑也盡量使用色譜級(jí)純,稱樣要精準(zhǔn)。
  配置好后必須通過(guò)0.45μm或0.22μm濾膜過(guò)濾并超聲脫氣20min以上。
  注意:緩沖鹽要臨用新配。
  總結(jié)
  流動(dòng)相的設(shè)計(jì)與調(diào)整是液相色譜實(shí)驗(yàn)中至關(guān)重要的一環(huán)。通過(guò)合理的混合方式、試劑選擇、pH值調(diào)整以及含緩沖鹽流動(dòng)相的精確配制,可以確保實(shí)驗(yàn)的高效性和準(zhǔn)確性。同時(shí),根據(jù)實(shí)驗(yàn)需要,靈活運(yùn)用由強(qiáng)到弱、三倍規(guī)則和粗調(diào)轉(zhuǎn)微調(diào)等原則,可以進(jìn)一步優(yōu)化實(shí)驗(yàn)條件,提高分離效果。
 

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