国产精品视频一区二区三区四,亚洲av美洲av综合av,99国内精品久久久久久久,欧美电影一区二区三区电影

產(chǎn)品推薦:氣相|液相|光譜|質(zhì)譜|電化學(xué)|元素分析|水分測(cè)定儀|樣品前處理|試驗(yàn)機(jī)|培養(yǎng)箱


化工儀器網(wǎng)>技術(shù)中心>其他文章>正文

歡迎聯(lián)系我

有什么可以幫您? 在線咨詢

慢病毒構(gòu)建穩(wěn)轉(zhuǎn)細(xì)胞系——艾柏森生物

來(lái)源:安諾倫(北京)生物科技有限公司   2024年06月18日 11:30  


 

慢病毒(Lentivirus)是一種逆轉(zhuǎn)錄病毒,屬于慢病毒屬,其特點(diǎn)是能夠感染分裂和非分裂的細(xì)胞,并且具有較長(zhǎng)的潛伏期。慢病毒載體因其高效的轉(zhuǎn)導(dǎo)效率和較低的免疫原性,被廣泛應(yīng)用于基因治療和生物醫(yī)學(xué)研究中。構(gòu)建慢病毒穩(wěn)轉(zhuǎn)細(xì)胞系是現(xiàn)代生物技術(shù)研究中的一個(gè)重要步驟,以下是構(gòu)建慢病毒穩(wěn)轉(zhuǎn)細(xì)胞系的一般步驟:

 

目標(biāo)基因的選擇與克?。菏紫?,需要確定你想要穩(wěn)定表達(dá)的目標(biāo)基因,并將其克隆到慢病毒載體中。慢病毒載體通常包含啟動(dòng)子、目的基因表達(dá)框、polyA信號(hào)等元件。

 

載體構(gòu)建:將目標(biāo)基因克隆到慢病毒載體中,構(gòu)建重組慢病毒載體。這通常涉及到限制性內(nèi)切酶切割、連接酶連接等分子克隆技術(shù)。

 

共轉(zhuǎn)染產(chǎn)生病毒顆粒:將重組慢病毒載體與包裝質(zhì)粒(如gag/pol、revvsv-g等)共轉(zhuǎn)染到宿主細(xì)胞中,如HEK293T細(xì)胞,以產(chǎn)生具有感染能力的慢病毒顆粒。

 

病毒顆粒的收集與濃縮:轉(zhuǎn)染后48-72小時(shí),收集含病毒顆粒的培養(yǎng)基,通過超速離心等方法進(jìn)行濃縮,以提高病毒滴度。

 

病毒感染細(xì)胞:將濃縮的病毒顆粒與目標(biāo)細(xì)胞共培養(yǎng),使病毒整合到宿主細(xì)胞基因組中。可以通過觀察綠色熒光蛋白(GFP)等報(bào)告基因的表達(dá)來(lái)評(píng)估感染效率。

 

篩選穩(wěn)轉(zhuǎn)細(xì)胞:感染后,通過抗生素篩選(如嘌呤霉素、新霉素等)或其他篩選標(biāo)記,篩選出穩(wěn)定表達(dá)外源基因的細(xì)胞克隆。

 

單克隆培養(yǎng):將篩選出的穩(wěn)轉(zhuǎn)細(xì)胞進(jìn)行限制稀釋,形成單克隆,以確保細(xì)胞群體的均一性。

 

擴(kuò)增與鑒定:對(duì)單克隆細(xì)胞進(jìn)行擴(kuò)增培養(yǎng),并進(jìn)行分子生物學(xué)鑒定,如PCR、Western blot等,以確認(rèn)目標(biāo)基因的整合和表達(dá)。

 

功能研究:利用構(gòu)建好的穩(wěn)轉(zhuǎn)細(xì)胞系進(jìn)行后續(xù)的功能研究,如藥物篩選、信號(hào)通路分析、疾病模型建立等。

 

長(zhǎng)期保存:將穩(wěn)轉(zhuǎn)細(xì)胞系凍存于液氮中,以備后續(xù)使用。

構(gòu)建慢病毒穩(wěn)轉(zhuǎn)細(xì)胞系是一個(gè)復(fù)雜的過程,需要精確的實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)和嚴(yán)格的實(shí)驗(yàn)操作。此外,由于慢病毒的潛在致病性,實(shí)驗(yàn)過程中還需遵循相關(guān)的生物安全規(guī)范。通過這一過程,研究人員可以獲得穩(wěn)定表達(dá)特定基因的細(xì)胞模型,為疾病機(jī)理研究和藥物開發(fā)提供重要的實(shí)驗(yàn)工具。

 


免責(zé)聲明

  • 凡本網(wǎng)注明“來(lái)源:化工儀器網(wǎng)”的所有作品,均為浙江興旺寶明通網(wǎng)絡(luò)有限公司-化工儀器網(wǎng)合法擁有版權(quán)或有權(quán)使用的作品,未經(jīng)本網(wǎng)授權(quán)不得轉(zhuǎn)載、摘編或利用其它方式使用上述作品。已經(jīng)本網(wǎng)授權(quán)使用作品的,應(yīng)在授權(quán)范圍內(nèi)使用,并注明“來(lái)源:化工儀器網(wǎng)”。違反上述聲明者,本網(wǎng)將追究其相關(guān)法律責(zé)任。
  • 本網(wǎng)轉(zhuǎn)載并注明自其他來(lái)源(非化工儀器網(wǎng))的作品,目的在于傳遞更多信息,并不代表本網(wǎng)贊同其觀點(diǎn)和對(duì)其真實(shí)性負(fù)責(zé),不承擔(dān)此類作品侵權(quán)行為的直接責(zé)任及連帶責(zé)任。其他媒體、網(wǎng)站或個(gè)人從本網(wǎng)轉(zhuǎn)載時(shí),必須保留本網(wǎng)注明的作品第一來(lái)源,并自負(fù)版權(quán)等法律責(zé)任。
  • 如涉及作品內(nèi)容、版權(quán)等問題,請(qǐng)?jiān)谧髌钒l(fā)表之日起一周內(nèi)與本網(wǎng)聯(lián)系,否則視為放棄相關(guān)權(quán)利。
企業(yè)未開通此功能
詳詢客服 : 0571-87858618
浑源县| 永川市| 霍城县| 永安市| 囊谦县| 武山县| 宣威市| 武城县| 元氏县| 广东省| 莫力| 肇东市| 荥经县| 清涧县| 阳谷县| 咸宁市| 衡山县| 镇康县| 长子县| 克东县| 福清市| 呼和浩特市| 钦州市| 垫江县| 岳池县| 麻城市| 新昌县| 沧州市| 漾濞| 营山县| 阳春市| 星子县| 图木舒克市| 杭锦后旗| 获嘉县| 伊吾县| 龙江县| 洛宁县| 江达县| 海伦市| 德安县|