細(xì)菌或細(xì)胞等顆粒性抗原與相應(yīng)抗體直接反應(yīng),出現(xiàn)的凝集現(xiàn)象,主要有玻片法和試管法。玻片法是抗原和相應(yīng)抗體在玻片上進(jìn)行的凝集反應(yīng),用于定性檢測(cè)抗原,如 ABO 血型鑒定、細(xì)菌鑒定等。試管法是在試管中倍比稀釋待檢血清,加入已知顆粒性抗原進(jìn)行的凝集反應(yīng),用于定量檢測(cè)抗體,如診斷傷寒病的肥達(dá)試驗(yàn)。試管法凝集反應(yīng)時(shí),抗原抗體結(jié)合出現(xiàn)明顯可見反應(yīng)的大的抗血清或抗原制劑稀釋度稱為效價(jià),又稱滴度。其原理是細(xì)菌、螺旋體和紅細(xì)胞等顆粒性抗原,在適當(dāng)?shù)碾娊赓|(zhì)參與下可直接與相應(yīng)抗體結(jié)合出現(xiàn)凝集,稱直接凝集反應(yīng)。參加凝集反應(yīng)的抗原稱凝集原,抗體則稱為凝集素。從方法上來講,有玻片法和試管法兩類。
玻片法凝集主要用于抗原的定性分析,短時(shí)間便能觀察結(jié)果醫(yī)學(xué)教|育網(wǎng)搜集整理,一般用來鑒定菌種或分型;也用于人類AB0血型的測(cè)定。
試管凝集反應(yīng)是用定量抗原懸液與一系列遞度倍比稀釋的待檢血清混合,保溫靜置后,根據(jù)每管內(nèi)顆粒凝集的程度,以判斷待檢血清中有無相應(yīng)抗體及其效價(jià),可以用來協(xié)助臨床診斷或流行病原調(diào)查研究。醫(yī)學(xué)教育網(wǎng)整理例如Widal反應(yīng)、Well-Felix反應(yīng)、輸血時(shí)也常用于受體和供體兩者間的交叉配血試驗(yàn)。
顆??乖c抗體直接結(jié)合出現(xiàn)的凝集現(xiàn)象稱為直接凝集反應(yīng)。
(1)玻片凝集反應(yīng)
?、偃∏鍧嵅F粡?,用記號(hào)筆劃為三格,并注明號(hào)碼。無菌操作下,用接種環(huán)于第1格、第2格內(nèi)加1:10稀釋的傷寒桿菌診斷血清1~2滴,第3格加1~2滴生理鹽水。
②無菌操作下,用接種環(huán)取傷寒桿菌培養(yǎng)物少許,混于第3格中,再混于第1格中(不能先混第1格再混第3格,因?yàn)檫@樣將使診斷血清混入鹽水而影響對(duì)照結(jié)果),將細(xì)菌與鹽水或血清混合均勻,使呈乳狀液。此時(shí)取菌量不可過多,使懸液呈輕度乳濁即可。
?、弁ㄈ£幮詫?duì)照菌培養(yǎng)物少許,于第2格內(nèi)混勻。
④輕輕搖動(dòng)玻片,經(jīng)1~2min后肉眼觀察。出現(xiàn)乳白色凝集塊者,即為陽(yáng)性反應(yīng);仍為乳濁液者,即為陰性反應(yīng)。如結(jié)果不夠清晰,可將玻片放于低倍顯微鏡下觀察。
(2)試管凝集反應(yīng)
試管凝集反應(yīng)為一種定量試驗(yàn),用已知抗原檢查血清中有無特異抗體,并測(cè)定其相對(duì)含量。方法如下。
?、偃崈粜≡嚬?4只分兩排排列于試管架上,每排7只依次用蠟筆注明號(hào)碼,于每管中分別加入0.5mL生理鹽水。
?、谠诘?排第1管中加入1:10稀釋傷寒H血清0.5mL ,于管內(nèi)連續(xù)吹吸3次,使血清與鹽水充分混合,而后吸出0.5mL注入第2管,同樣予以混勻后吸出0.5mL注入第3管。依次類推,稀釋到第6管,自第6管中吸出0.5mL 棄去。此時(shí),自第1~6管的血清稀釋倍數(shù)為1:20、1:40、1:80、1:160、1:320、1:640。第7管不加血清作為對(duì)照。
③同法用吸管吸取1:10稀釋傷寒桿菌O血清加入第2排第1管,并依次如上法予以稀釋。
?、苡靡埔汗芪畻U菌H菌液,加收第1排各管中每管0.5mL (由鹽水對(duì)照管開始,依次由后向前加入),此時(shí)血清稀釋倍數(shù)又增加了1倍。
?、萃ㄓ诘?排各管中加入傷寒桿菌O菌液0.5mL。
?、迣⒏鞴苷袷幓靹?,放37℃水浴箱中2~4h或37℃孵育箱中過夜,次日取出觀察結(jié)果。
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