肝缺血(HI)大鼠模型

動(dòng)物品系：SD大鼠，SPF級(jí)，健康，雄性，體重：200g~220g

實(shí)驗(yàn)分六組：空白對(duì)照組、模型組、陽性藥物組、受試藥物低、中、高劑量組

實(shí)驗(yàn)周期：72h

造模方法：缺血再灌注

1.大鼠行術(shù)前12 h禁食，自由飲水。

2.腹腔注射麻醉，麻醉成功后將大鼠平躺在手術(shù)臺(tái)上膠帶固定四肢，將大鼠腹部至劍突術(shù)區(qū)剃毛 ，術(shù)區(qū)消毒。

3.取腹正中切口1cm，打開腹腔，小心分離出肝臟左、中葉之肝蒂（左、中葉肝臟供血的門靜脈和肝動(dòng)脈）。

4. 用無創(chuàng)血管夾夾閉中葉和左葉的門靜脈和肝動(dòng)脈，使約70%的肝臟缺血，以防止發(fā)生嚴(yán)重腸系膜靜脈淤血。0.5min后，與非阻斷的右葉相比，肉眼可見阻斷葉明顯變白，說明阻斷成功，用止血鉗夾閉皮膚切口臨時(shí)關(guān)閉腹腔，同時(shí)將大鼠放在37℃恒溫加熱墊上保溫。

5. 完成持續(xù)缺血60min后，重新打開腹腔，迅速取出血管夾，恢復(fù)缺血肝血流，0.5min左右可見缺血區(qū)肝臟由白色逐漸恢復(fù)為鮮紅色表明再灌注成功，逐層縫合腹腔肌肉和皮膚關(guān)閉腹腔，完成手術(shù)。待大鼠清醒后放回飼養(yǎng)室飼養(yǎng)，密切關(guān)注大鼠的狀態(tài)及生存狀況并做好記錄。

6. 術(shù)后分別于再灌注0h、3h、6h、12h、24h及72h處死大鼠，下腔靜脈取血1ml，室溫靜置2h后于4℃3000r離心10分鐘提取血清，放入-80冰箱凍存。采用全自動(dòng)生化分析儀檢測(cè)血清中ALT（谷丙轉(zhuǎn)氨酶）、AST（天門冬氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶）的水平。同時(shí)統(tǒng)一取肝左葉組織1．5cm×1cm×0．2cm留作病理標(biāo)本或分生標(biāo)本。

注意事項(xiàng)

1.分離肝門時(shí)用棉簽分離，可避免對(duì)肝臟的損傷

2.術(shù)前禁食有利于手術(shù)進(jìn)行

3.阻斷血流要一次成功，否則會(huì)造成缺血預(yù)處理，減輕損傷程度

4.再灌后用棉簽輕輕按壓肝臟，有利于血流恢復(fù)

5.取材時(shí)鑷子不要損傷肝臟