肝缺血(HI)大鼠模型
動物品系:SD大鼠,SPF級,健康,雄性,體重:200g~220g
實驗分六組:空白對照組、模型組、陽性藥物組、受試藥物低、中、高劑量組
實驗周期:72h
造模方法:缺血再灌注
1.大鼠行術前12 h禁食,自由飲水。
2.腹腔注射麻醉,麻醉成功后將大鼠平躺在手術臺上膠帶固定四肢,將大鼠腹部至劍突術區(qū)剃毛 ,術區(qū)消毒。
3.取腹正中切口1cm,打開腹腔,小心分離出肝臟左、中葉之肝蒂(左、中葉肝臟供血的門靜脈和肝動脈)。
4. 用無創(chuàng)血管夾夾閉中葉和左葉的門靜脈和肝動脈,使約70%的肝臟缺血,以防止發(fā)生嚴重腸系膜靜脈淤血。0.5min后,與非阻斷的右葉相比,肉眼可見阻斷葉明顯變白,說明阻斷成功,用止血鉗夾閉皮膚切口臨時關閉腹腔,同時將大鼠放在37℃恒溫加熱墊上保溫。
5. 完成持續(xù)缺血60min后,重新打開腹腔,迅速取出血管夾,恢復缺血肝血流,0.5min左右可見缺血區(qū)肝臟由白色逐漸恢復為鮮紅色表明再灌注成功,逐層縫合腹腔肌肉和皮膚關閉腹腔,完成手術。待大鼠清醒后放回飼養(yǎng)室飼養(yǎng),密切關注大鼠的狀態(tài)及生存狀況并做好記錄。
6. 術后分別于再灌注0h、3h、6h、12h、24h及72h處死大鼠,下腔靜脈取血1ml,室溫靜置2h后于4℃3000r離心10分鐘提取血清,放入-80冰箱凍存。采用全自動生化分析儀檢測血清中ALT(谷丙轉(zhuǎn)氨酶)、AST(天門冬氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶)的水平。同時統(tǒng)一取肝左葉組織1.5cm×1cm×0.2cm留作病理標本或分生標本。
注意事項
1.分離肝門時用棉簽分離,可避免對肝臟的損傷
2.術前禁食有利于手術進行
3.阻斷血流要一次成功,否則會造成缺血預處理,減輕損傷程度
4.再灌后用棉簽輕輕按壓肝臟,有利于血流恢復
5.取材時鑷子不要損傷肝臟
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