手機(jī)版
化工儀器網(wǎng)手機(jī)版
化工儀器網(wǎng)小程序
官方微信
公眾號(hào)：chem17
掃碼關(guān)注視頻號(hào)
先把蛋白稀釋一定的倍數(shù)，比如說(shuō)10倍、20倍稀釋（這樣可以大體確定一個(gè)參數(shù)），將抗原進(jìn)行一系列稀釋包被微量反應(yīng)板，再用一定稀釋度的陽(yáng)性參考血清和陰性參考血清進(jìn)行孵育后洗滌，再加酶結(jié)合物進(jìn)行反應(yīng)，經(jīng)孵育洗滌后，加底物溶液顯色，終止反應(yīng)后分別測(cè)定o.d值，選擇o.d值≥1.0的那個(gè)抗原稀釋度為zui適包被濃度。一般總是要選擇那個(gè)o.d值稍大于1.0，而不選擇小于1.0的抗原濃度。陰性參考血清o.d值要求<0.1-0.2。也就是要求陽(yáng)性參考血清和陰性參考血清的o.d值有明顯差別。
在ELISA試劑盒實(shí)驗(yàn)血清為什么要稀釋？有兩個(gè)原因：
1.競(jìng)爭(zhēng)抑制比較明顯，應(yīng)稀釋競(jìng)爭(zhēng)物；
2.血清中含有的性腺激素比較低，應(yīng)該濃縮才對(duì)。
ELISA試劑盒血清標(biāo)本的保存建議有以下幾點(diǎn)：
1.樣本的采集及血清分離中要注意盡量避免細(xì)菌污染，一則細(xì)菌的生長(zhǎng)，其所分泌的一些酶可能會(huì)對(duì)抗原抗體等蛋白產(chǎn)生分解作用；二則一些細(xì)菌的內(nèi)源性酶如大腸桿菌的β-半乳糖苷酶本身會(huì)對(duì)用相應(yīng)酶作標(biāo)記的測(cè)定方法產(chǎn)生非特異性干擾。
2.血清標(biāo)本如是以無(wú)菌操作分離，則可以在2～8℃下保存一周，ELISA如為有菌操作，則建議冰凍保存。樣本的長(zhǎng)時(shí)間保存，應(yīng)在-70℃以下。
3.冰凍保存的血清標(biāo)本須注意避免因停電等造成的反復(fù)凍融。標(biāo)本的反復(fù)凍融所產(chǎn)生的機(jī)械剪切力將對(duì)標(biāo)本中的蛋白等分子產(chǎn)生破壞作用，從而引起假陰性結(jié)果。此外，凍融標(biāo)本的混勻亦應(yīng)注意，不要進(jìn)行劇烈振蕩，反復(fù)顛倒混勻即可。
4.要注意避免出現(xiàn)嚴(yán)重溶血。血紅蛋白中含有血紅素基團(tuán)，其有類似過(guò)氧化物的活性，因此，在以HRP為標(biāo)記酶的測(cè)定中，如血清標(biāo)本中血紅蛋白濃度較高，則其就很容易在溫育過(guò)程中吸附于固相，從而與后面加入的HRP底物反應(yīng)顯色。
5.標(biāo)本在保存中如出現(xiàn)細(xì)菌污染所致的混濁或絮狀物時(shí)，應(yīng)離心沉淀后取上清檢測(cè)。
針對(duì)以上技術(shù)資訊內(nèi)容，如果您有不太清楚或者了解更多信息(包括基本信息/技術(shù)資料/解決方案)，都可以隨時(shí)我司業(yè)務(wù)員。另外力于提供生命科學(xué)領(lǐng)域的技術(shù)服務(wù)，提供實(shí)驗(yàn)技術(shù)服務(wù)，為廣大科研工作者大大節(jié)省了重復(fù)勞動(dòng)的時(shí)間和精力，我們有過(guò)硬的技術(shù)咨詢和完善的售后服務(wù)，為您解決后顧之憂。
相關(guān)產(chǎn)品
免責(zé)聲明
- 凡本網(wǎng)注明“來(lái)源：化工儀器網(wǎng)”的所有作品，均為浙江興旺寶明通網(wǎng)絡(luò)有限公司-化工儀器網(wǎng)合法擁有版權(quán)或有權(quán)使用的作品，未經(jīng)本網(wǎng)授權(quán)不得轉(zhuǎn)載、摘編或利用其它方式使用上述作品。已經(jīng)本網(wǎng)授權(quán)使用作品的，應(yīng)在授權(quán)范圍內(nèi)使用，并注明“來(lái)源：化工儀器網(wǎng)”。違反上述聲明者，本網(wǎng)將追究其相關(guān)法律責(zé)任。
- 本網(wǎng)轉(zhuǎn)載并注明自其他來(lái)源（非化工儀器網(wǎng)）的作品，目的在于傳遞更多信息，并不代表本網(wǎng)贊同其觀點(diǎn)和對(duì)其真實(shí)性負(fù)責(zé)，不承擔(dān)此類作品侵權(quán)行為的直接責(zé)任及連帶責(zé)任。其他媒體、網(wǎng)站或個(gè)人從本網(wǎng)轉(zhuǎn)載時(shí)，必須保留本網(wǎng)注明的作品第一來(lái)源，并自負(fù)版權(quán)等法律責(zé)任。
- 如涉及作品內(nèi)容、版權(quán)等問(wèn)題，請(qǐng)?jiān)谧髌钒l(fā)表之日起一周內(nèi)與本網(wǎng)聯(lián)系，否則視為放棄相關(guān)權(quán)利。
采購(gòu)中心