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CD分子流式抗體選購指南

來源:翌圣生物科技(上海)股份有限公司   2024年07月09日 09:26  

CD分子,即白細(xì)胞分化抗原,也稱分化簇(Cluster of Differentiation),廣泛分布于各種免疫細(xì)胞表面,如B細(xì)胞、T細(xì)胞、樹突狀細(xì)胞和NK細(xì)胞等,是不同譜系的白細(xì)胞在正常分化成熟的不同階段及活化過程中,出現(xiàn)或消失的細(xì)胞表面標(biāo)記。監(jiān)測不同CD抗原的表達(dá)譜使得基于細(xì)胞在不同免疫過程中的功能的細(xì)胞類型鑒定、分離和表型分型成為可能。


表1.免疫分型的重要CD標(biāo)志物



常見CD分子生物學(xué)功能

CD3

是一種20-26 kDa的分子,表達(dá)于所有成熟的T淋巴細(xì)胞(約占正常人外周血淋巴細(xì)胞的60-80%)、NK-T細(xì)胞和一些胸腺細(xì)胞。CD3與T細(xì)胞受體α/β或γ/δ二聚體相關(guān)聯(lián),還在抗原識別過程中參與T細(xì)胞的激活和信號轉(zhuǎn)導(dǎo)。CD3單抗被用于測定血液中成熟T細(xì)胞。

CD4

也稱為T4,是一種55kD的單鏈跨膜糖蛋白,屬于免疫球蛋白超家族。CD4存在于大多數(shù)胸腺細(xì)胞、T細(xì)胞的一個亞群、也低水平表達(dá)于單核/巨噬細(xì)胞。CD4是免疫應(yīng)答中的共受體(通過與MHC II類分子結(jié)合發(fā)揮協(xié)同受體活性),同時也是HIV感染的主要受體(CD4是HIV-1表面糖蛋白gp120的主要受體)。CD4調(diào)節(jié)T細(xì)胞的活化、參與T/B細(xì)胞的粘附、T細(xì)胞的分化、T細(xì)胞選擇和信號轉(zhuǎn)導(dǎo)。

CD8a

是一種32-34kD的I型糖蛋白。它與CD8b形成同源二聚體(CD8a/a)或異源二聚體(CD8a/b)。CD8,也稱為T8和Leu2,是免疫球蛋白超家族的成員,存在于大多數(shù)胸腺細(xì)胞、外周血T細(xì)胞的一個亞群以及NK細(xì)胞上(幾乎全表達(dá)CD8a同源二聚體)。CD8作為MHC I的共受體在抗原識別和T細(xì)胞活化中發(fā)揮作用,并在胸腺分化中扮演了重要角色。CD8a中的兩個結(jié)構(gòu)域?qū)ζ涔δ芊浅V匾喊饨Y(jié)合MHC Iα3的IgSF結(jié)構(gòu)域和胞內(nèi)酪氨酸激酶p56 Lck的CXCP結(jié)構(gòu)域。

CD28

是一種44 kD的二硫鍵連接的同源二聚體型I糖蛋白。它是免疫球蛋白超家族的成員,也被稱為T44或Tp44。CD28 在大多數(shù)T系細(xì)胞、NK細(xì)胞亞群和漿細(xì)胞上表達(dá)。CD28采用CDR3樣環(huán)中高度保守的MYPPY結(jié)構(gòu)同時結(jié)合CD80 和CD86。CD28被認(rèn)為是一個主要的共刺激分子,誘導(dǎo)T淋巴細(xì)胞的激活和IL-2合成,并防止細(xì)胞死亡。體外研究表明,CD28為抗原呈遞細(xì)胞的CD80和CD86上的配位提供了T細(xì)胞激活和增殖所需的共刺激信號。

CD19

是一種 95 kD 的 I 型跨膜糖蛋白,也被稱為 B4。它是免疫球蛋白超家族的成員,在 B 細(xì)胞(從前 B 細(xì)胞到成熟 B 細(xì)胞,但在漿細(xì)胞上不存在)和濾泡樹突狀細(xì)胞上表達(dá)。CD19 參與 B 細(xì)胞的發(fā)育、激活和分化。CD19 與 CD21(CR2)和 CD81(TAPA-1)形成復(fù)合物,并作為 BCR 共受體發(fā)揮作用。

CD20

是一種 33-37 kD 的膜蛋白,有四個跨膜區(qū)段,也被稱為 B1 和 Bp35。CD20 在前 B 細(xì)胞、靜止和活化的 B 細(xì)胞(不包括漿細(xì)胞)、一些濾泡樹突狀細(xì)胞以及 T 細(xì)胞亞群中低水平表達(dá)。CD20 在活化的 B 細(xì)胞和惡性 B 細(xì)胞中被大量磷酸化。CD20 的同源寡聚體復(fù)合物被認(rèn)為形成 B 細(xì)胞質(zhì)膜的 Ca2+導(dǎo)電離子通道。CD20 分子參與 B 細(xì)胞的激活,并與各種 Src 家族激酶(Lyn、Lck、Fyn)相關(guān)。它與 MHC I 和 II 類、CD53、CD81 和 CD82 形成復(fù)合物。


CD抗原在免疫分型中被廣泛用作細(xì)胞標(biāo)志物,可用于識別特定白細(xì)胞群和淋巴細(xì)胞亞群的存在和比例,并對其進(jìn)行分離。流式細(xì)胞術(shù)和免疫組織化學(xué)(IHC)是檢測和分析這些CD標(biāo)志物的常用檢測方法。


流式抗體選擇注意事項

01

抗體的基礎(chǔ)信息

待測靶標(biāo)表達(dá)位置:胞膜表達(dá)或胞內(nèi)表達(dá),靶標(biāo)表達(dá)位置不同,染色方式也不同

靶標(biāo)標(biāo)為位置

染色方式

胞膜表達(dá)(CD3、CD4、CD8等CD分子)

無需固定和破膜

胞漿表達(dá)(IL系列 ,IFN-γ, TNF-α等)

甲醛/皂素進(jìn)行固定和破膜處理

胞核表達(dá)(Foxp3等)

甲醛/Triton法進(jìn)行固定和破膜處理


抗體反應(yīng)性需與樣品來源一致



抗體反應(yīng)性需與樣品來源一致

選擇明確標(biāo)注可用于流式實驗的抗體;


02

確定流式細(xì)胞儀的參數(shù)

激光器:提前了解使用的流式細(xì)胞儀的激光器配置,常見的有紫色激光(405nm)、藍(lán)色激光(488nm)、紅色激光(635nm)等;

濾光片:檢測通道的多少,決定最多可以同時檢測幾個指標(biāo)。熒光素的發(fā)射波長與濾光片有關(guān),所選擇熒光素要在儀器的可檢測范圍內(nèi)。


03

熒光素的選擇

抗原表達(dá)弱或分群不明顯,選擇強(qiáng)熒光,如PE、APC;

抗原表達(dá)強(qiáng)或分群明顯,選擇弱熒光,如FITC;

常用熒光強(qiáng)弱排序:PE-Cy5>PE>AF647>APC>PerCP>Cy5.5>FITC。


04

同型對照抗體的選擇

選擇與一抗相同種屬來源,相同免疫球蛋白亞型,相同熒光染料標(biāo)記的同型對照抗體。如32102ES-FITC Mouse Anti-Human CD3 mAb(IgG2a), 同型對照選擇FITC Mouse IgG2a。



產(chǎn)品數(shù)據(jù)展示

  • 檢測樣本:人外周血淋巴細(xì)胞

  • 檢測抗體:FITC Mouse Anti-Human CD3 mAb(紅色)

  • 同型對照:FITC Mouse IgG2a(灰色)



人免疫細(xì)胞亞群流式抗體選購列表

亞群

抗原

產(chǎn)品貨號

產(chǎn)品名稱

產(chǎn)品規(guī)格

T Cell

(T淋巴細(xì)胞)

CD3

32101ES

Purified Mouse Anti-Human CD3 mAb

100 μg/1 mg

32102ES

FITC Mouse Anti-Human CD3 mAb

25 T/100 T

32103ES

APC Mouse Anti-Human CD3 mAb

25 T/100 T

32104ES

PE Mouse Anti-Human CD3 mAb

25 T/100 T

CD4

32111ES

Purified Mouse Anti-Human CD4 mAb

100 μg/1 mg

32112ES

FITC Mouse Anti-Human CD4 mAb

25 T/100 T

32113ES

APC Mouse Anti-Human CD4 mAb

25 T/100 T

32114ES

PE Mouse Anti-Human CD4 mAb

25 T/100 T

CD8a

32121ES

Purified Mouse Anti-Human CD8a mAb

100 μg/1 mg

32122ES

FITC Mouse Anti-Human CD8a mAb

25 T/100 T

32123ES

APC Mouse Anti-Human CD8a mAb

25 T/100 T

32124ES

PE-Cy5 Mouse Anti-Human CD8a mAb

25 T/100 T

CD28

32131ES

Purified Mouse Anti-Human CD28 mAb

100 μg/1 mg

32132ES

FITC Mouse Anti-Human CD28 mAb

25 T/100 T

32133ES

APC Mouse Anti-Human CD28 mAb

25 T/100 T

32134ES

PE Mouse Anti-Human CD28 mAb

25 T/100 T

B Cell

(B淋巴細(xì)胞)

CD3

32101ES

Purified Mouse Anti-Human CD3 mAb

100 μg/1 mg

32102ES

FITC Mouse Anti-Human CD3 mAb

25 T/100 T

32103ES

APC Mouse Anti-Human CD3 mAb

25 T/100 T

32104ES

PE Mouse Anti-Human CD3 mAb

25 T/100 T

CD19

32141ES

Purified Mouse Anti-Human CD19 mAb

100 μg/1 mg

32142ES

FITC Mouse Anti-Human CD19 mAb

25 T/100 T

32143ES

APC Mouse Anti-Human CD19 mAb

25 T/100 T

32144ES

PE-Cy5 Mouse Anti-Human CD19 mAb

25 T/100 T

CD20

32151ES

Purified Mouse Anti-Human CD20 mAb

100 μg/1 mg

32152ES

FITC Mouse Anti-Human CD20 mAb

25 T/100 T

32153ES

APC Mouse Anti-Human CD20 mAb

25 T/100 T

32124ES

PE Mouse Anti-Human CD20 mAb

25 T/100 T



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