支原體（Mycoplasma）又稱(chēng)霉形體，是目前發(fā)現(xiàn)的最小、無(wú)細(xì)胞壁的原核生物，直徑大小0.1~0.3μm，能通過(guò)濾膜且呈高度多形性，是哺乳動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)中相對(duì)常見(jiàn)且難以檢測(cè)的細(xì)菌污染物。

支原體污染對(duì)細(xì)胞培養(yǎng)造成多方面的不良影響，已經(jīng)成為在細(xì)胞培養(yǎng)時(shí)的一個(gè)嚴(yán)重問(wèn)題，保守估計(jì)常規(guī)細(xì)胞培養(yǎng)中支原體污染率為15~35%，嚴(yán)重干擾實(shí)驗(yàn)結(jié)果的可信度。

細(xì)胞培養(yǎng)中95%的支原體污染主要是由萊氏無(wú)膽甾原體、精氨酸支原體、口腔支原體、發(fā)酵支原體、人型支原體、豬鼻支原體引起的。支原體在培養(yǎng)基上，形成的菌落呈“煎雞蛋“形狀。細(xì)胞培養(yǎng)上清和細(xì)胞膜適宜支原體生長(zhǎng)，寄生在細(xì)胞表面的支原體可以穿透宿主細(xì)胞膜。

支原體污染來(lái)源主要有：細(xì)胞培養(yǎng)液或其成分（如培養(yǎng)基原料、血清和其他試劑）、實(shí)驗(yàn)室操作人員、細(xì)胞培養(yǎng)箱、液氮培養(yǎng)箱、空氣中的粒子和氣溶膠、抗生素的過(guò)度使用、密封不當(dāng)?shù)募?xì)胞培養(yǎng)物和污染了支原體的細(xì)胞等。

與此同時(shí)，這些污染對(duì)應(yīng)的危害為：導(dǎo)致細(xì)胞制品或以細(xì)胞為介質(zhì)進(jìn)行生產(chǎn)的產(chǎn)品在下游純化過(guò)程中可能因未能有效去除支原體而造成批次報(bào)廢、污染其接觸的所有相關(guān)設(shè)備設(shè)施甚至中間或終產(chǎn)品、導(dǎo)致其他正常細(xì)胞受到支原體污染、導(dǎo)致重要細(xì)胞或病毒種子庫(kù)受到支原體污染而報(bào)廢、導(dǎo)致實(shí)驗(yàn)室整體環(huán)境受到污染而被迫停止生產(chǎn)或?qū)嶒?yàn)操作進(jìn)行支原體去除、導(dǎo)致支原體產(chǎn)生耐受性而更難以去除、支原體污染面積擴(kuò)大、對(duì)實(shí)驗(yàn)室中的其他細(xì)胞培養(yǎng)物造成威脅。

因此，定期進(jìn)行支原體檢測(cè)和去除，確保無(wú)支原體存在細(xì)胞培養(yǎng)體系內(nèi)才能保障科學(xué)研究工作的正常進(jìn)行。

支原體是一種比較常見(jiàn)但通常難以去除的污染類(lèi)型，對(duì)于涉及細(xì)胞培養(yǎng)的生物制品工藝過(guò)程，法規(guī)要求“必須確保無(wú)支原體污染”。

圖1.中外法規(guī)里要求的支原體污染檢測(cè)點(diǎn)

傳統(tǒng)的支原體檢測(cè)方法主要為培養(yǎng)法和指示細(xì)胞法，但由于這兩種方法的檢測(cè)周期長(zhǎng)或靈敏度問(wèn)題，致使企業(yè)生產(chǎn)或產(chǎn)品放行周期拉長(zhǎng)。而隨著細(xì)胞基因治療的發(fā)展，行業(yè)內(nèi)對(duì)支原體檢測(cè)時(shí)效性和靈敏度要求越來(lái)越高，短的貨架期不足以支撐如此長(zhǎng)的檢測(cè)周期，因此快檢的NAT方法從眾多支原體檢測(cè)方法中脫穎而出。

圖2.中外法規(guī)里列舉的支原體檢測(cè)方法

基于NAT (nucleic acid amplification techniques)核酸擴(kuò)增技術(shù)，翌圣生物開(kāi)發(fā)了一系列支原體快速檢測(cè)的試劑盒，其中包括熒光探針qPCR法支原體檢測(cè)試劑盒、一步恒溫顯色法支原體檢測(cè)試劑盒和巢式PCR法支原體檢測(cè)試劑盒。

是一種快速定性檢測(cè)生產(chǎn)原料、細(xì)胞庫(kù)、病毒種子、病毒或細(xì)胞收獲液、治療用細(xì)胞中潛在支原體污染的產(chǎn)品，即主要用于生物醫(yī)藥領(lǐng)域的藥物研發(fā)、生產(chǎn)、放行等方面。