TET家族的5mC羥化酶包括TET1、TET2和TET3。這些TET蛋白可能通過結(jié)合富含CpG的區(qū)域來防止不必要的DNA甲基轉(zhuǎn)移酶活性，并通過羥化酶活性將5mC轉(zhuǎn)化為5hmC，進而轉(zhuǎn)化為5-羧基胞嘧啶（5-caC）來促進DNA去甲基化。研究表明，基因組5hmC水平與TET羥化酶活性相關(guān)。此外，TET1在轉(zhuǎn)錄激活和抑制中顯示出雙重功能，通過結(jié)合ES細胞中的不同目標(biāo)基因。TET1也是急性髓系白血病中MLL基因的融合伴侶，被認(rèn)為是一種致癌蛋白。TET2被發(fā)現(xiàn)在白血病中經(jīng)常發(fā)生突變，被認(rèn)為是一種腫瘤抑制因子。TET3已被證明在哺乳動物合子的DNA甲基化重編程過程中發(fā)揮d特作用。因此，激活腫瘤抑制因子TET酶如TET2或抑制致癌蛋白TET酶如TET1，在癌癥診斷和開發(fā)新的基于靶點的癌癥治療中將非常重要。然而，目前檢測TET羥化酶活性/抑制的方法很少，既適用于核提取物，也適用于純化的酶。

為了解決這個問題，EpigenTek開發(fā)并提供了Epigenase™ 5mC羥化酶TET活性/抑制檢測試劑盒（比色法）。

TET Activity試劑盒（比色法）（不包含）綁定底物，并轉(zhuǎn)換甲基化底物為羥甲基化產(chǎn)物.其產(chǎn)物可以被特異抗體所識別.比率或者大量的羥基化產(chǎn)物與酶活性成比例，然后通過酶標(biāo)儀，450nm處比色法檢測結(jié)果.TET酶活性與光密度值成比例.

該TET Activity試劑盒（#P-3086）具有以下優(yōu)點和特點：

1、比色法檢測，步驟簡單明了，方便快速。整個程序可在5小時內(nèi)完成。

2、直接通過檢測TET轉(zhuǎn)化的羥甲基化產(chǎn)物來測量TET羥化酶活性。

3、創(chuàng)新的試劑盒組成使背景信號極低，使檢測簡單、準(zhǔn)確、可靠和一致。

4、既可以使用細胞/組織提取物，也可以使用純化的TET蛋白，這允許檢測體內(nèi)外TET羥化酶抑制劑的抑制效果。

5、新穎的檢測原理實現(xiàn)了高靈敏度。即使是低至20納克的純化TET1羥化酶的活性也能被檢測到。

6、包含羥甲基化標(biāo)準(zhǔn)品，允許量化TET羥化酶的特異性活性。

7、條狀微孔板格式使檢測靈活：可進行手動或高通量分析（96次檢測）。

艾美捷TET Activity試劑盒原則與程序：

在該測定中，甲基化底物被穩(wěn)定地涂覆在微孔板孔上?；钚?span style="font-family: Calibri;">TET與底物結(jié)合，將甲基化底物轉(zhuǎn)化為羥甲基化產(chǎn)物。TET轉(zhuǎn)化的羥甲基化產(chǎn)物可以用特異性抗體識別。羥甲基化產(chǎn)物的比例或量與酶活性成正比，然后可以通過讀取微孔板分光光度計在450nm波長下的吸光度進行比色測量。TET酶的活性又與測量的光密度強度成正比。

TET Activity試劑盒用戶指南：

用途： Epigenase™ 5mC羥化酶TET活性/抑制檢測試劑盒適用于使用核提取物或純化的TET同工酶（TET 1-3）從包括哺乳動物、植物、真菌和細菌在內(nèi)的廣泛物種中測量總5mC羥化酶TET酶的活性/抑制，并且可以應(yīng)用于包括但不限于培養(yǎng)細胞、新鮮和冷凍組織等多種形式。

起始材料： 輸入材料可以是核提取物或純化的TET酶。每個檢測所需的核提取物量可以是2微克到20微克，最佳范圍為5-10微克。純化酶的用量可以是20納克到1微克，具體取決于酶的純度和催化活性。

內(nèi)部控制： 本試劑盒提供了TET檢測標(biāo)準(zhǔn)品（5-羥甲基胞嘧啶），用于量化TET酶活性。由于TET活性可能因組織而異，以及正常和疾病狀態(tài)之間可能存在差異，建議運行重復(fù)樣本以確保產(chǎn)生的信號是經(jīng)過驗證的。

注意事項： 為了避免交叉污染，請小心地將樣本或溶液滴入條狀微孔板孔中。使用防氣溶膠的移液管頭，并在液體轉(zhuǎn)移之間始終更換移液管頭。在整個過程中佩戴手套。如果手套與樣本接觸，請立即更換手套。