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生物制品的純度和雜質分析

來源:上海斯邁歐分析儀器有限公司   2024年07月22日 14:45  

電荷變異體分析 

電荷異構體分析是生物治療蛋白質藥物的一項監(jiān)管要求。這些大的異質分子在生產(chǎn)過程中歷經(jīng)多種酶促翻譯后修飾,例如糖基化 Fc 段賴氨酸切除。此外,在純化和儲存過程中可發(fā)生多種化學修飾,例如氧化和脫酰胺。蛋白質電荷的均一性對蛋白藥物結 構、穩(wěn)定性、親和力和療效有著非常重要的影響。離子交換電荷異構體分析是一種高分辨率技術,在分析這些異構體時非常有用。 ICH Q6B 等法規(guī)中規(guī)定使用蛋白質電荷異構體圖譜分析法。


基于 Orbitrap Fusion Lumos 平臺的簡單快速抗體藥物天冬氨酸異構化解析 與小分子藥物相比,單抗藥物更易在生產(chǎn)、運輸和儲存的過程中,發(fā)生各種翻譯后修飾的變化,影響藥物分子的穩(wěn)定性,同時影 響蛋白的結構和功能。 由于異構化本身不會引起分子量和電荷的變化,因此大大增加分析的難度。在完整蛋白的水平上,可以使用離子交換和親和色譜 進行天冬氨酸異構化分析,不過對于低豐度的異構化水平就無法準確確定。本方法使用 Thermofisher 納升級液相和最新的三合 一超高分辨質譜儀 Orbitrap Fusion Lumos,采用 ETD 碎裂方式,建立了天冬氨酸異構化質譜解析方法,可以廣泛的應用到常規(guī) 抗體藥物肽段的精細解析中。 通過設置脫酰胺化后修飾和查找包含天冬氨酸異構化的特征碎片離子,在該抗體的酶解肽段中,最終準確鑒定到發(fā)生天冬氨酸異 構化的肽段有兩條,第一條發(fā)生天冬氨酸異構化的肽段為 VVSVLTVLHQDWLNGK,其中第 14 位的 N 發(fā)生了脫酰胺化,并且在 該過程中,產(chǎn)生了異構化的天冬氨酸;第二條包含異構化位點的肽段為 GFYPSDIAVEWESNGQPENNYK,其中第 14 和第 19 N 發(fā)生了脫酰胺化,并且在該過程中,第 14 位的天冬酰胺發(fā)生了異構化。

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