NMR的定量分析方法

與其他光譜方法相同，NMR定量分析是通過比較不同的吸收峰強(qiáng)度實(shí)現(xiàn)的。在進(jìn)行NMR定量分析時(shí)，對(duì)于確定的核（如質(zhì)子），其信號(hào)強(qiáng)度與產(chǎn)生該信號(hào)的核（如質(zhì)子）的數(shù)目成正比，而與核的化學(xué)性質(zhì)無關(guān)，故一般只要對(duì)該化合物中某一基團(tuán)上質(zhì)子引起的峰面積進(jìn)行比較，即可求出其含量。當(dāng)分析混合物時(shí)，利用內(nèi)標(biāo)法或相對(duì)比較法分析混合物中某一化合物時(shí)，無需該化合物的純品作為對(duì)照標(biāo)品。內(nèi)標(biāo)法只要找一合適的內(nèi)標(biāo)物進(jìn)行比較就可求出其含量；而采用各個(gè)組分的各自基團(tuán)上質(zhì)子產(chǎn)生的吸收峰強(qiáng)度進(jìn)行相對(duì)比較，便可求得其相對(duì)含量。因此，在測(cè)量峰面積或峰高以前，必需了解化合物的各組成基團(tuán)上質(zhì)子所產(chǎn)生共振峰的相對(duì)位置，也就是它們的化學(xué)位移值，并選擇一個(gè)合適的峰作為測(cè)量峰。

USP（24）采用的NMR定量分析方法主要有兩種：

1、內(nèi)標(biāo)法（測(cè)量法）：

此法為NMR分析zui常用的方法，它與GC內(nèi)標(biāo)法相似，在樣品溶液中，直接加入一定量的內(nèi)標(biāo)物后，進(jìn)行NMR光譜測(cè)定。將樣品基團(tuán)上的質(zhì)子引起的共振峰面積進(jìn)行比較，當(dāng)樣品與內(nèi)標(biāo)均經(jīng)精密稱重時(shí)，則樣品的重量（）可由下式求得：

=Ws×（Ax/As）×（E/Es）

式中，Ws為內(nèi)標(biāo)物重量；Ax為樣品峰面積；As為內(nèi)標(biāo)物峰面積；E為樣品在該化學(xué)位移處的質(zhì)子當(dāng)量，即E=樣品分子量/產(chǎn)生該共振峰的基團(tuán)中的質(zhì)子數(shù)；Es為內(nèi)標(biāo)物在該化學(xué)位移處的質(zhì)子當(dāng)量，即Es=內(nèi)標(biāo)物分子量/產(chǎn)生該共振峰的基團(tuán)中的質(zhì)子數(shù)。若樣品稱重為W，則百分含量=/W×100%

對(duì)內(nèi)標(biāo)物的要求：一個(gè)較好的內(nèi)標(biāo)物至少應(yīng)具備以下性質(zhì)：①不應(yīng)與樣品中任何組分相互作用。②能產(chǎn)生單一的共振峰。在掃描的磁場(chǎng)區(qū)域中，參比共振峰與樣品峰的位置至少有30Hz間隔。③應(yīng)能溶于分析溶劑中。④應(yīng)有盡可能小的質(zhì)子當(dāng)量（Es）。NMR定量分析常用的內(nèi)標(biāo)物有：六甲基三硅氧烷（0.15ppm）；三噁烷（5.10ppm）；吡嗪（8.51ppm）；苯或苯甲酸芐酯（5.3ppm處，芐基質(zhì)子的吸收峰），適用于非芳香化合物；馬來酸適用于非鏈烯氫化合物。

2、相對(duì)測(cè)量法：

當(dāng)不能獲得樣品的純品或合適的內(nèi)標(biāo)物時(shí)，可用相對(duì)測(cè)量法進(jìn)行分析。計(jì)算含量是以基團(tuán)上的一個(gè)質(zhì)子引起的吸收峰面積（A1/n1）和雜質(zhì)基團(tuán)上一個(gè)質(zhì)子引起的吸收峰面積（A2/n2）進(jìn)行比較，然后按下式計(jì)算樣品與該雜質(zhì)的相對(duì)百分含量：

樣品的相對(duì)百分含量= ｛（A1/n1）/〔（A1/n1）+（A2/n2）〕｝×100%

式中，n1，n2是基團(tuán)的質(zhì)子數(shù)。

NMR定量分析方法簡(jiǎn)單、快速、專屬性高和不破壞被測(cè)樣品，可選擇性地測(cè)定混合藥物或藥物制劑中的組分乃至藥物的立體異構(gòu)體。只要樣品中每個(gè)組分有一個(gè)或一組特征的、且不重疊的吸收峰存在時(shí)，一般都有可能應(yīng)用NMR方法進(jìn)行定量分析。

D Offset（基線位置的突然改變
1電源電壓波動(dòng) 使用穩(wěn)壓器
2 電路接口處連接不好 檢查，清洗其接口處，擰緊接口
3進(jìn)樣口被污染
4色譜柱被污染
5毛細(xì)管末端插入檢測(cè)器太深
6 檢測(cè)器被污染
E毛刺
1 電磁干擾 關(guān)閉電磁干擾源
2顆粒污染進(jìn)入檢測(cè)器
3氣路密封松動(dòng)，氣體泄露 擰緊松動(dòng)的密封
4檢測(cè)器內(nèi)部電路接口或輸入，輸出信號(hào)接口松動(dòng) 檢查，清洗，擰緊接口，更換之
積塵或被腐蝕
F Wander（低頻率的噪音）
1溫度，壓力等環(huán)境條件的波動(dòng) 找到環(huán)境因素變化與基線的關(guān)系，然后穩(wěn)定之
2溫度控制漂移 測(cè)量檢測(cè)器的溫度
3 載氣中含雜質(zhì)（溫度穩(wěn)定時(shí)） 更換載氣或氣體凈化器
4進(jìn)樣口被污染
5毛細(xì)管被污染
6氣體流速控制失靈 清洗或更換氣體