HPLC高效液相色譜系統(tǒng)是一種廣泛應(yīng)用于化學(xué)、生物學(xué)、醫(yī)藥等領(lǐng)域的分析儀器,用于分離、鑒定和定量復(fù)雜樣品中的化合物。
HPLC高效液相色譜系統(tǒng)組成包括泵、自動(dòng)進(jìn)樣器、色譜柱和檢測(cè)器。
1、HPLC泵
使流動(dòng)相持續(xù)通過(guò) HPLC系統(tǒng)。常見(jiàn)的HPLC高效液相色譜儀泵類(lèi)型有幾種:二元 HPG 泵較常用于需要兩種溶劑梯度的常規(guī)和高通量應(yīng)用。四元 LPG 泵用于方法開(kāi)發(fā)或者靈活性至關(guān)重要的情形,等度泵用于簡(jiǎn)單的 QA/QC 應(yīng)用。三元 DGP泵應(yīng)用于工作流程和自動(dòng)化解決方案或雙系統(tǒng)方法。
2、自動(dòng)進(jìn)樣器
自動(dòng)將樣本準(zhǔn)確、精確地注入儀器中。HPLC高效液相色譜自動(dòng)進(jìn)樣器的工作原理是抽吸精確體積的樣本并將其注入到流動(dòng)相流中。與手動(dòng)進(jìn)樣相比,使用自動(dòng)進(jìn)樣器可減少手動(dòng)操作并提高進(jìn)樣精度和準(zhǔn)確度,這是進(jìn)行定量HPLC分析必須先考量的的重點(diǎn)。
3、色譜柱
色譜柱裝有特定的固定相,可根據(jù)特定的物理化學(xué)特性分離各化合物。較常見(jiàn)的HPLC色譜柱由不銹鋼制成,填充有通常經(jīng)修飾的多孔硅膠顆粒,例如,C18鍵合是反相 HPLC的常見(jiàn)選擇。然而,有多種多樣的HPLC色譜柱硬件和填充材料。
4、檢測(cè)器
對(duì)從色譜柱分離和洗脫的目標(biāo)化合物進(jìn)行鑒定或定量分析。從色譜柱洗脫后,流動(dòng)相將分離的條帶或分析物運(yùn)送到檢測(cè)器 – 最終的HPLC組件。雖然有很多 HPLC檢測(cè)方法,但是沒(méi)有一種方法可以檢測(cè)所有可能的分析物。液相色譜工作人員可以在同一次運(yùn)行中使用兩種或更多種HPLC檢測(cè)方法來(lái)更深入地表征樣本。HPLC 檢測(cè)器的種類(lèi)繁多。常用HPLC檢測(cè)器種類(lèi)有紫外-可見(jiàn)光、熒光、質(zhì)譜、電霧式、蒸發(fā)光散射和折射率檢測(cè)器,這些不同種類(lèi)的HPLC檢測(cè)器有著不同的特點(diǎn)。
HPLC高效液相色譜系統(tǒng)組成包括泵、自動(dòng)進(jìn)樣器、色譜柱和檢測(cè)器。
1、HPLC泵
使流動(dòng)相持續(xù)通過(guò) HPLC系統(tǒng)。常見(jiàn)的HPLC高效液相色譜儀泵類(lèi)型有幾種:二元 HPG 泵較常用于需要兩種溶劑梯度的常規(guī)和高通量應(yīng)用。四元 LPG 泵用于方法開(kāi)發(fā)或者靈活性至關(guān)重要的情形,等度泵用于簡(jiǎn)單的 QA/QC 應(yīng)用。三元 DGP泵應(yīng)用于工作流程和自動(dòng)化解決方案或雙系統(tǒng)方法。
2、自動(dòng)進(jìn)樣器
自動(dòng)將樣本準(zhǔn)確、精確地注入儀器中。HPLC高效液相色譜自動(dòng)進(jìn)樣器的工作原理是抽吸精確體積的樣本并將其注入到流動(dòng)相流中。與手動(dòng)進(jìn)樣相比,使用自動(dòng)進(jìn)樣器可減少手動(dòng)操作并提高進(jìn)樣精度和準(zhǔn)確度,這是進(jìn)行定量HPLC分析必須先考量的的重點(diǎn)。
3、色譜柱
色譜柱裝有特定的固定相,可根據(jù)特定的物理化學(xué)特性分離各化合物。較常見(jiàn)的HPLC色譜柱由不銹鋼制成,填充有通常經(jīng)修飾的多孔硅膠顆粒,例如,C18鍵合是反相 HPLC的常見(jiàn)選擇。然而,有多種多樣的HPLC色譜柱硬件和填充材料。
4、檢測(cè)器
對(duì)從色譜柱分離和洗脫的目標(biāo)化合物進(jìn)行鑒定或定量分析。從色譜柱洗脫后,流動(dòng)相將分離的條帶或分析物運(yùn)送到檢測(cè)器 – 最終的HPLC組件。雖然有很多 HPLC檢測(cè)方法,但是沒(méi)有一種方法可以檢測(cè)所有可能的分析物。液相色譜工作人員可以在同一次運(yùn)行中使用兩種或更多種HPLC檢測(cè)方法來(lái)更深入地表征樣本。HPLC 檢測(cè)器的種類(lèi)繁多。常用HPLC檢測(cè)器種類(lèi)有紫外-可見(jiàn)光、熒光、質(zhì)譜、電霧式、蒸發(fā)光散射和折射率檢測(cè)器,這些不同種類(lèi)的HPLC檢測(cè)器有著不同的特點(diǎn)。
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