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ELISA(Enzyme-Linked Immunosorbent Assay，酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn))是一種常用的實(shí)驗(yàn)技術(shù)，用于檢測(cè)和定量分析樣品中特定抗原或抗體的存在。ELISA是基于免疫學(xué)原理的一種高靈敏度和高特異性的實(shí)驗(yàn)方法。下面讓我們一起來(lái)看看ELISA實(shí)驗(yàn)操作方法吧！
ELISA實(shí)驗(yàn)通常包括以下步驟：
1. 涂覆：將待檢測(cè)的抗原或抗體溶液加入到微孔板(通常是96孔板)中，并在孔板表面上形成一層固定的抗原或抗體。這個(gè)過(guò)程被稱(chēng)為涂覆。
2. 阻斷：為了防止非特異性結(jié)合，需要在涂覆后加入一種阻斷劑，例如牛血清蛋白(BSA)或牛奶粉，以覆蓋孔板上未被固定的表面。阻斷劑可以減少非特異性結(jié)合和降低背景信號(hào)。
3. 樣品加入：將待測(cè)樣品加入到微孔板中，樣品中的目標(biāo)抗原或抗體與固定在孔板上的抗體或抗原相互作用。
4. 洗滌：通過(guò)反復(fù)洗滌孔板，去除未結(jié)合的物質(zhì)，以減少背景信號(hào)。
5. 探針加入：加入與待測(cè)物體特異性結(jié)合的酶標(biāo)記二抗(例如辣根過(guò)氧化物酶-HRP)或酶標(biāo)記抗原，使其與樣品中的目標(biāo)物體結(jié)合。
6. 洗滌：再次洗滌孔板，去除未結(jié)合的酶標(biāo)記物。
7. 底物加入：加入一種底物，其與酶標(biāo)記物相互作用，產(chǎn)生可測(cè)量的信號(hào)。常用的底物是一種可被酶催化產(chǎn)生顏色或熒光的物質(zhì)。
8. 反應(yīng)停止：通過(guò)加入一種停止劑，停止底物的反應(yīng)，阻止信號(hào)進(jìn)一步增加。
9. 信號(hào)測(cè)量：使用光譜儀或熒光測(cè)量?jī)x測(cè)量底物反應(yīng)產(chǎn)生的信號(hào)，根據(jù)信號(hào)的強(qiáng)度來(lái)確定樣品中目標(biāo)物體的濃度。
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