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【產(chǎn)品名稱】
通用名稱：豬口蹄疫病毒抗體（IgG）診斷試劑盒（酶聯(lián)免疫法）
英文名稱：Porcine Foot and Mouth Disease Virus Antibody Test Kit （ELISA）, FMDV Ab
【包裝規(guī)格】
96×1測試/盒
【預(yù)期用途】
本試劑盒用于定性測定豬血清中O型口蹄疫病毒IgG抗體。用于評估豬場豬口蹄疫疫苗免疫狀況，感染豬的血清學(xué)診斷以及豬口蹄疫的流行病學(xué)調(diào)查。
【檢驗原理】
本試劑盒應(yīng)用固相酶聯(lián)免疫吸附試驗（ELISA）原理，由包被有高純度的豬口蹄疫抗原的微孔反應(yīng)板、辣根過氧化物酶標記的抗豬IgG及其它試劑配套組成。其反應(yīng)機理為包被抗原與樣本中的FMDV-IgG結(jié)合，再與酶標抗豬IgG抗體形成“包被抗原+FMDV-IgG+酶標抗豬IgG抗體”復(fù)合物，加入顯色劑，通過酶催化反應(yīng)顯色。顯色深淺與FMDV-IgG的量成正比，當(dāng)顯色超過設(shè)定的臨界值時結(jié)果判為陽性，表明免疫有效或有自然感染。
【主要組成成份】
| 1． | FMDV抗原包被板 | 96T×1塊 | 包被有FMDV抗原 |
| 2． | 酶標記物（黃蓋） | 22ml×1瓶 | 含辣根過氧化物酶標記的抗豬IgG抗體 |
| 3． | 樣本稀釋液（透明蓋） | 50ml×1瓶 | 主要成份為0.01M PBS緩沖液 |
| 4． | 濃縮洗滌液（20×）（白蓋） | 50ml×1瓶 | PBST緩沖液，用前用去離子水20倍稀釋 |
| 5． | FMDV-IgG陰性對照血清（綠蓋） | 1.5ml×1瓶 | 主要成份為FMDV-IgG陰性血清 |
| 6． | FMDV-IgG陽性對照血清（紅蓋） | 1.5ml×1瓶 | 主要成份為FMDV-IgG陽性血清 |
| 7． | 顯色劑A（紫蓋） | 12ml×1瓶 | 主要成份為過氧化脲 |
| 8． | 顯色劑B（黃蓋） | 12ml×1瓶 | 主要成份為TMB |
| 9． | 終止液（藍蓋） | 12ml×1瓶 | 主要成份為HF |
| 10． | 蓋板膜 | 6張 | |
| 11． | 說明書 | 1份 | |
不同批號的試劑組份不可混用。
【儲存條件及有效期】
于2℃～8℃避光保存，防止冷凍，有效期6個月。
【適用儀器】
1．酶標儀，單波長630nm測量。
2．ELISA用洗板機。
3．微量移液器。
4．水浴箱或恒溫箱。
5．微量振蕩器。
【樣本要求】
1．本試劑檢測的樣本為豬血清，樣本應(yīng)無菌采集，2℃～8℃貯存不超過一周，長期應(yīng)在-20℃以下保存。
2．避免使用嚴重溶血、有沉淀物、含懸浮纖維蛋白及污染長菌的樣本。
3．樣本中含有常規(guī)用量的EDTA、枸櫞酸鈉或肝素鈉等抗凝劑不影響本實驗。
【檢驗方法】
1．加樣：根據(jù)樣本數(shù)量，取所需板條。設(shè)空白對照1孔（不加任何液體）；設(shè)陰、陽性對照各2孔，分別加入不稀釋的陰、陽性對照血清100μL于相應(yīng)孔中。其余為樣本孔，用樣品稀釋液將待檢樣品40倍稀釋后混勻（如將6μL樣本加到234μL樣品稀釋液中），每孔加入稀釋好的樣本100μL。
2．溫育：加好樣后振蕩10秒，充分混勻，置37℃溫育30分鐘。
3．洗板：甩去孔內(nèi)液體，用洗滌液（濃縮洗滌液用去離子水以20倍稀釋）注滿反應(yīng)板孔，洗滌3次，每次停留3分鐘，zui后一次洗后拍干。
4．加酶：每孔加酶標記物100ul，注意：空白孔不加酶標記物，也不加其他任何液體。
5．溫育：置37℃溫育30分鐘。
6．洗板：同上洗滌。
7．顯色：每孔加顯色劑A、B各50ul，振蕩混勻，室溫（25℃）避光反應(yīng)10分鐘。
8．終止：每孔加終止液50ul，振蕩10秒，充分混勻。終止后10分鐘內(nèi)讀數(shù)。
9．讀數(shù)：用酶標儀單波長630nm以空白孔調(diào)零，讀取各孔吸光度值（A值）。注意：若酶標儀讀數(shù)前沒有以空白孔調(diào)零，則所得的結(jié)果均應(yīng)減去空白孔A值再做判定。
10．結(jié)果判定：
樣品A值大于0.4，判為FMDV-IgG陽性；樣品A值在0.2到0.4之間，判為FMDV-IgG可疑；樣品A值小于0.2，判為FMDV-IgG陰性。
陰性對照血清A值應(yīng)小于0.20，陽性對照血清A值應(yīng)大于或等于0.40，否則試驗不成立，需重新試驗。
注意：若酶標儀讀數(shù)前沒有以空白孔調(diào)零，則上述所有測得的結(jié)果均應(yīng)減去空白孔A值再做判定。
【參考值（參考范圍）】
未自然感染也未被免疫豬口蹄疫病毒疫苗的健康豬群為陰性，A值小于0.2。
【檢驗結(jié)果的解釋】
1．嚴重溶血、血清中纖維蛋白分離不充分、含紅血球、有沉淀物、長菌的樣本可能導(dǎo)致假陽性。
2．因個體差異或免疫時間長短等因素可能會出現(xiàn)個別豬只免疫疫苗后檢測結(jié)果為陰性。
3．陽性結(jié)果用于感染豬的血清學(xué)診斷以及的流行病學(xué)調(diào)查時需結(jié)合其他方法和臨床資料進行。
【檢驗方法的局限性】
FMDV-IgG可作為評價豬口蹄疫疫苗免疫效果以及豬口蹄疫病毒感染的血清學(xué)診斷指標，但不能區(qū)別二者，若想確認是疫苗還是野毒感染產(chǎn)生的抗體需結(jié)合臨床資料、免疫程序或口蹄疫野毒鑒別ELISA試劑盒來區(qū)分。
【產(chǎn)品性能指標】
1．特異性 以本品檢測30份陰性參比血清不出假陽性。
2．敏感性 以本品檢測30份陽性參比血清不出現(xiàn)陰性。
3．精密性 用精密性參比品測定，CV（%）不高于15%（n=10）。
4．穩(wěn)定性 試劑盒在2℃～8℃放置6個月或37℃放置3天，檢定結(jié)果達到以上1-3標準。
【注意事項】
1．本試劑盒僅用于體外診斷。
2．本試劑盒應(yīng)按含有傳染性材料對待，操作時需戴手套穿工作衣。
3．實驗廢棄物應(yīng)經(jīng)121℃高壓蒸汽滅菌30分鐘，或用5.0g/L次氯酸鈉等消毒劑處理30分鐘后廢棄。
4．微孔板從冷藏環(huán)境中取出時應(yīng)在室溫中平衡至潮氣干盡后方可拆開，未用完的微孔板須放回有干燥劑的鋁箔袋并密封4℃保存。未用完的液體試劑應(yīng)蓋好瓶蓋，與其它配套組份放入試劑盒中于2℃-8℃避光保存。
5．若20倍濃縮洗滌液出現(xiàn)結(jié)晶，屬正常現(xiàn)象，放置37℃至溶解后即可。
6．應(yīng)用微量移液器加入樣本及試劑，并經(jīng)常校對其準確性。
7．加洗滌液時應(yīng)做到滿而不溢，防止孔口有游離酶不能洗凈或各孔間的交叉污染。
8．終止液有腐蝕性，若濺到皮膚或衣物上應(yīng)立即用大量清水沖洗干凈。
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