Waters Styragel色譜柱的溶劑和樣品制備

本章介紹了：

■ 溶劑預(yù)備

■ 溶劑更換

■ 將色譜柱轉(zhuǎn)換至高溫溶劑

■ 樣品制備

a. 溶劑預(yù)備

使用清潔的溶劑以獲得可重現(xiàn)的結(jié)果，同時(shí)可免去維護(hù)操作。使用LC級(jí)或更高級(jí)別的溶劑，并過(guò)濾除去大于0.45 μm的微粒物質(zhì)。想獲得過(guò)濾器選擇和溶劑相容性一覽表，請(qǐng)參閱沃特世耗材指南的過(guò)濾器相關(guān)章節(jié)。

b. 更換溶劑

溶劑相溶性

Waters Styragel色譜柱的出廠溶劑可由您自選：甲苯、THF或DMF。某些應(yīng)用要求采用其它溶劑。溶劑轉(zhuǎn)換時(shí)選擇相溶的溶劑能得到最佳效果。請(qǐng)參閱下表了解相溶性溶劑。

對(duì)于高溫色譜，要在三氯苯（TCB）或鄰二氯苯（ODCB）等溶劑條件下使用Waters Styragel色譜柱，必須將色譜柱轉(zhuǎn)換至高溫下所選溶劑。

高溫轉(zhuǎn)換步驟

將色譜柱組轉(zhuǎn)換至高溫操作的方法：

1. 在室溫下將系統(tǒng)轉(zhuǎn)換至色譜柱出廠溶劑。

2. 以0.1 mL/min的流速?zèng)_洗節(jié)約溶劑型色譜柱，同時(shí)在至少3小時(shí)內(nèi)逐漸將溫度升至90 ℃。

溶劑節(jié)約型色譜柱（以0.1 mL/min的流速?zèng)_洗色譜柱，同時(shí)在至少3小時(shí)內(nèi)逐漸將溫度升至90 ℃。）

色譜柱由THF轉(zhuǎn)換為HFIP或Y-丁內(nèi)酯時(shí)，將系統(tǒng)設(shè)置為55 ℃。

3. 在系統(tǒng)處于90 ℃時(shí)，以0.1 mL/min流速將其轉(zhuǎn)換至高溫溶劑，每根色譜柱使用12 mL溶劑。然后以0.2 mL/min流速、至少四倍柱體積的溶劑沖洗系統(tǒng)。

使用色譜柱組時(shí)，溶劑用量為上述步驟中指定的色譜柱體積乘以使用的色譜柱數(shù)目。

4. 以0.1 mL/min的流速轉(zhuǎn)換至高溫溶劑。每根色譜柱使用至少20 mL溶劑。

5. 在至少4小時(shí)內(nèi)將溫度升至最終條件，同時(shí)繼續(xù)以0.1 mL/min的流速?zèng)_洗色譜柱。溫度不得超過(guò)150 ℃。

在至少4小時(shí)內(nèi)將溫度升至最終條件，同時(shí)繼續(xù)以0.1 mL/min的流速?zèng)_洗色譜柱。溫度不得超過(guò)150 ℃。

6. 將流速調(diào)節(jié)為最終操作條件。最佳流速為0.3 mL/min。

將流速調(diào)節(jié)為最終操作條件。最佳流速為0.3 mL/min。

返回至室溫

反向執(zhí)行上述步驟可使色譜柱返回至室溫?；蛘?，將流速設(shè)置為0.1 mL/min，并使溫度每30分鐘降低10 ℃。

重啟色譜柱

要重啟色譜柱，將流速維持在0.1 mL/min，并在10小時(shí)內(nèi)將溫度升至所需溫度。然后設(shè)置所需的操作流速。

為獲得最長(zhǎng)的色譜柱壽命，應(yīng)避免溫度循環(huán)變化。色譜柱未使用時(shí)，應(yīng)維持在運(yùn)行溫度，并將流速降低至0.1 mL/min。

c. 樣品制備

良好的樣品前處理能夠延長(zhǎng)色譜柱壽命并確保獲得可重現(xiàn)的結(jié)果。制備樣品時(shí)應(yīng)將色譜柱容量、樣品粘度、檢測(cè)器類型和靈敏度等因素考慮在內(nèi)。采用0.45 μm過(guò)濾器除去微粒。參閱沃特世耗材指南過(guò)濾器相關(guān)章節(jié)，獲得過(guò)濾器選擇和溶劑相容性信息。

活性聚合物

某些活性聚合物（例如環(huán)氧聚合物）能“活化”色譜柱。特定類別的活性聚合物能夠延長(zhǎng)色譜柱壽命并提高重現(xiàn)性。

樣品濃度

樣品濃度對(duì)粘度和進(jìn)樣體積均有影響。較小的樣品量能夠得到較窄的色譜峰，但對(duì)于粘性樣品可能需要更多用量且稀釋度更高。表2列出了為獲得最佳結(jié)果的推薦樣品濃度。

高分子量聚合物

高分子量聚合物尤其容易產(chǎn)生粘度問(wèn)題。分析高分子量聚合物時(shí)，請(qǐng)使用表2所列的濃度。運(yùn)行窄分布聚合物（例如聚苯乙烯標(biāo)準(zhǔn)品）時(shí)，每根色譜柱的進(jìn)樣體積為50 μL（對(duì)于溶劑高效色譜柱，每根色譜柱的進(jìn)樣體積為20 μL），樣品濃度為0.02%。

由于溶液剪切作用，分子量為四百萬(wàn)甚至更高的聚苯乙烯標(biāo)準(zhǔn)品極易發(fā)生降解。剪切效應(yīng)表現(xiàn)為分子量分布寬于預(yù)期值。操作得當(dāng)時(shí)，可以成功處理分子量高達(dá)2000萬(wàn)的聚合物。

超高分子量聚合物

剪切效應(yīng)也是大多數(shù)超高分子量聚合物所應(yīng)當(dāng)考慮的因素。這些聚合物的剪切效應(yīng)可能不如窄分子量標(biāo)準(zhǔn)品的剪切效應(yīng)那樣容易觀察。超高分子量的聚烯烴餾分易發(fā)生剪切和初始沉淀現(xiàn)象。對(duì)于這些餾分，采用極稀的溶液（例如，0.02%）能夠最大限度減少沉淀現(xiàn)象。