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植物血凝素的生物學功能與應用指南

來源:愛必信(上海)生物科技有限公司   2024年08月19日 10:28  

產品介紹:

 

植物血凝素(Phytohemagglutinin, PHA)是指從紅蕓豆(Phaseolus Vulgaris)中提取的一種菜豆類凝集素。它是由4個亞基通過非共價鍵結合形成的四聚體糖蛋白,包含兩種亞基分子,L亞基(白細胞凝集素)和E(紅細胞凝集素),含有5種異構體(L4,L3E1,L2E2,L1E3 和E4)。L亞基具有白細胞凝集和高促有絲分裂活性;E亞基具有高紅細胞凝集和低促有絲分裂活性。

 

根據(jù)不同的亞基組成,PHA可以分為幾種不同的形式,主要包括PHA-L、PHA-E、PHA-P和PHA-M。以下是它們的在科學研究中的主要用途:

 

PHA-L:

 

主要功能:PHA-L是純化的L4四聚體,主要作為T淋巴細胞的刺激原,廣泛用于免疫學研究。它可用作INF-γICS、ELISPOT實驗的陽性對照;PBMC培養(yǎng)的刺激物;順行神經示蹤劑等。

生物學活性:具有高促有絲分裂活性和白細胞凝集活性,但紅細胞凝集活性極低。

應用:主要用于刺激T細胞增殖和免疫反應研究。

 

PHA-E:

 

主要功能:PHA-E是純化的E4四聚體,主要用途是紅細胞凝集或者糖基化修飾的研究。

生物學活性:具有高紅細胞凝集活性和低促有絲分裂活性。

應用:主要用于紅細胞凝集實驗和糖基化研究。

 

PHA-P:

 

主要功能:PHA-P是在分離和純化PHA-L和PHA-E前的PHA的蛋白質形式,成分與PHA-M相當。

生物學活性:具有促進有絲分裂和誘導干擾素分泌的活性。

應用:主要用于刺激外周單個核細胞增殖,促進某些細胞因子的產生和膜表面蛋白的表達。

 

PHA-M:

 

主要功能:PHA-M是植物血凝素的粘性蛋白形式,成分與PHA-P相當。主要用于刺激外周單個核細胞增殖,促進某些細胞因子的產生和膜表面蛋白的表達。

生物學活性:具有促進有絲分裂和誘導干擾素分泌的活性。

應用:廣泛用于免疫學研究,特別是在細胞增殖和細胞因子產生方面。

 

客戶應用實例:

 

應用一、使用PHA-L(abs47014909)預刺激Jurkat T細胞,探究小分子PROTAC介導靶向蛋白降解治療STAT3依賴性上皮癌癥的機制[1]

 

將HCT116細胞以1×104個細胞/孔的密度接種到12孔板中進行附著,隨后用TSM-1(1μM)處理24h。然后,使用PHA(10μg/mL)和PMA(10ng/mL)預刺激Jurkat T細胞(6×104)4h。HCT116細胞與活化的Jurkat T細胞共培養(yǎng)24h。ELISA試劑盒用于檢測上清液培養(yǎng)基中IL-2的水平,IL-2是監(jiān)測T細胞活化的生物標志物。用結晶紫染色法對潛在的癌癥活細胞進行虛擬化。將細胞溶解在10%乙酸中后,使用Cytation 5酶標儀(BioTek)在595nm下對細胞進行定量。

 

圖1  TSM-1在體外誘導T細胞活化和浸潤

 

應用二:使用PHA-M(abs47014911)培養(yǎng)Jurkat T細胞,探究氟化物干擾免疫系統(tǒng)的機制[2]。

 

Jurkat T細胞(HTX4056,Otwo Biotech)在RPMI 1640培養(yǎng)基中生長,培養(yǎng)基補充了10%胎牛血清(FBS,abs972,Absin)、青霉素-鏈霉素溶液和5ug/mL植物血凝素-M(abs47014911,Absin),5ug/mL Ultra LEAFTM純化的抗人CD28。細胞系在37°C, 5%CO2和95%空氣的加濕培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。

 

圖2 氟化物可以抑制T細胞活化,阻礙T細胞受體的內化

 

PHA的不同形式主要區(qū)別在于它們的亞基組成和相應的生物學功能。PHA-L和PHA-E分別具有高促有絲分裂活性和高紅細胞凝集活性,而PHA-M和PHA-P則主要用于刺激細胞增殖和細胞因子產生。每種形式在免疫學研究和細胞生物學研究中都有其特定的應用。

 


參考文獻


[1] Jin J, Wu Y, Zhao Z, et al. Small-molecule PROTAC mediates targeted protein degradation to treat STAT3-dependent epithelial cancer[J]. JCI Insight. 2022;7(22):e160606.

[2] Zhu S, Liu B, Fu G, et al. PKC-θ is an important driver of fluoride-induced immune imbalance of regulatory T cells/effector T cells[J]. Sci Total Environ. 2024;934:173081.

 

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