絕對(duì)定量的標(biāo)準(zhǔn)品如何制作?
說到標(biāo)準(zhǔn)品,我們先說說絕對(duì)定量:絕對(duì)定量是指在實(shí)時(shí)熒光定量PCR實(shí)驗(yàn)中,對(duì)已知量的樣本進(jìn)行連續(xù)稀釋后擴(kuò)增,生成標(biāo)準(zhǔn)曲線。然后通過與此曲線比較,定量未知樣本,絕對(duì)定量可測(cè)定靶點(diǎn)的實(shí)際拷貝數(shù)。包括以下三個(gè)步驟:
(1)將標(biāo)準(zhǔn)品稀釋成不同濃度,作為模板進(jìn)行擴(kuò)增;
(2)以標(biāo)準(zhǔn)品拷貝數(shù)的對(duì)數(shù)值為橫坐標(biāo),以測(cè)得的Ct值為縱坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線;
(3)根據(jù)未知樣品的Ct值,即可在標(biāo)準(zhǔn)曲線中獲得樣品的拷貝數(shù)。
以上可以看出標(biāo)準(zhǔn)品之于絕對(duì)定量是非常非常重要的,那么標(biāo)準(zhǔn)品該怎樣選擇?
在GB/T22554-2010《基于標(biāo)準(zhǔn)樣品的線性校準(zhǔn)》中注明標(biāo)準(zhǔn)樣品的組分需要與被測(cè)樣品組分一致。
標(biāo)準(zhǔn)品 既可以是含有目的基因的線性化質(zhì)粒DNA,也可以是比目的基因擴(kuò)增片段長(zhǎng)的純化后的PCR產(chǎn)物,或者基因組DNA和cDNA,但是需要作為標(biāo)準(zhǔn)品的核酸必須保證穩(wěn)定并且需要精準(zhǔn)定量。并且由于核酸提取、逆轉(zhuǎn)錄等實(shí)驗(yàn)過程可能會(huì)影響反應(yīng)結(jié)果,所以需要注意標(biāo)準(zhǔn)品的實(shí)驗(yàn)步驟應(yīng)與實(shí)驗(yàn)樣品盡可能相同。常用標(biāo)準(zhǔn)品包括:
DNA標(biāo)準(zhǔn)品
純化的PCR擴(kuò)增片段或含有目的基因的克隆質(zhì)粒。
優(yōu)點(diǎn):易制備,儲(chǔ)存穩(wěn)定;
缺點(diǎn):缺少逆轉(zhuǎn)錄反應(yīng)過程。
RNA標(biāo)準(zhǔn)品
目的基因的體外轉(zhuǎn)錄RNA。
優(yōu)點(diǎn):結(jié)合逆轉(zhuǎn)錄反應(yīng)過程;
缺點(diǎn):制備時(shí)間長(zhǎng),不穩(wěn)定。
標(biāo)準(zhǔn)品的制備流程
如果是需要質(zhì)粒標(biāo)準(zhǔn)品的話建議咨詢我司直接購買!一步搞定省時(shí)省力!
相關(guān)產(chǎn)品
免責(zé)聲明
- 凡本網(wǎng)注明“來源:化工儀器網(wǎng)”的所有作品,均為浙江興旺寶明通網(wǎng)絡(luò)有限公司-化工儀器網(wǎng)合法擁有版權(quán)或有權(quán)使用的作品,未經(jīng)本網(wǎng)授權(quán)不得轉(zhuǎn)載、摘編或利用其它方式使用上述作品。已經(jīng)本網(wǎng)授權(quán)使用作品的,應(yīng)在授權(quán)范圍內(nèi)使用,并注明“來源:化工儀器網(wǎng)”。違反上述聲明者,本網(wǎng)將追究其相關(guān)法律責(zé)任。
- 本網(wǎng)轉(zhuǎn)載并注明自其他來源(非化工儀器網(wǎng))的作品,目的在于傳遞更多信息,并不代表本網(wǎng)贊同其觀點(diǎn)和對(duì)其真實(shí)性負(fù)責(zé),不承擔(dān)此類作品侵權(quán)行為的直接責(zé)任及連帶責(zé)任。其他媒體、網(wǎng)站或個(gè)人從本網(wǎng)轉(zhuǎn)載時(shí),必須保留本網(wǎng)注明的作品第一來源,并自負(fù)版權(quán)等法律責(zé)任。
- 如涉及作品內(nèi)容、版權(quán)等問題,請(qǐng)?jiān)谧髌钒l(fā)表之日起一周內(nèi)與本網(wǎng)聯(lián)系,否則視為放棄相關(guān)權(quán)利。