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Western Blot膜的選擇

來(lái)源:上海索寶生物科技有限公司   2012年04月20日 14:22  

          Western Blot印跡常用的轉(zhuǎn)移膜主要是硝酸纖維素膜(Nitrocellulose Blotting Membranes,NC)和PVDF膜,此外也有用尼龍膜、DEAE纖維素膜做蛋白印跡。
選擇的根據(jù)主要有:
a. 膜與目的蛋白分子的結(jié)合能力(也就是單位面積的膜能結(jié)合蛋白的載量),以及膜的孔徑(也就是攔截蛋白的大?。?;
b. 不影響后續(xù)的顯色檢測(cè)(也就是適和用于所選的顯色方法,信噪比好);
c. 如果后繼實(shí)驗(yàn)有其他要求,比如要做蛋白測(cè)序或者質(zhì)譜分析,還要根據(jù)不同目的來(lái)挑選不同的轉(zhuǎn)移膜。

NC膜的生產(chǎn)原理

勻漿配比

  購(gòu)買回來(lái)的原料硝酸纖維素粒子是一種非常普遍的有機(jī)化學(xué)物,溶解形成混漿,在該漿體內(nèi),通過(guò)加入一定比例的試劑來(lái)調(diào)整后形成的膜的性質(zhì),一般主要包含表面活性劑/高分子聚合物/鹽離子/成型劑等溶解的一個(gè)緩沖體系內(nèi)。不同的廠家加入的溶液配方不一樣,導(dǎo)致了產(chǎn)品的差異。

滾筒鋪膜

  配好的勻漿通過(guò)滾筒,形成了一張薄膜,平攤在十分光滑的平面載體上。過(guò)程與造紙非常相似。

成型

  當(dāng)勻漿內(nèi)的成型劑開始揮發(fā),膜逐步干燥成型。同時(shí)在這個(gè)過(guò)程中由于溫度比較高,有些廠家在這個(gè)過(guò)程采取了在密閉腔體內(nèi)成型,同時(shí)補(bǔ)充配方溶液的形式,來(lái)避免一些有效成分的蒸發(fā)。

切割

  通過(guò)以上步驟生產(chǎn)出來(lái)的膜是呈一個(gè)寬度極大的產(chǎn)品,寬度的大小直接和滾筒的大小相關(guān),滾筒越大生產(chǎn)越方便,但設(shè)備的成本也越高.寬膜要經(jīng)過(guò)切割才能成為我們購(gòu)買到的25mm或18mm(或20mm)寬的膜,而長(zhǎng)度上,成品卷膜和寬膜的長(zhǎng)度是相同的.理論上可以讓廠家切成你需要的任意寬度,但這樣會(huì)造成原料的浪費(fèi)和人力成本的增加,后來(lái)廠商在和試紙生產(chǎn)廠家的協(xié)調(diào)過(guò)程中,綜合用料成本和生產(chǎn)便利性基本確定了上面說(shuō)的寬度,以次為標(biāo)準(zhǔn)。

 

  從生產(chǎn)過(guò)程,我們可以得知,NC膜本身已經(jīng)添加了表面活性劑來(lái)改善親水能力,而且已經(jīng)存在有一定的緩沖系統(tǒng)(雖然對(duì)紙條測(cè)試影響不會(huì)很大)。

 

PVDF膜

 
  PVDF膜即聚偏二氟乙烯膜(polyvinylidene fluoride)是蛋白質(zhì)印跡法中常用的一種固相支持物。PVDF膜是疏水性的,膜孔徑有大有小,隨著膜孔徑的不斷減小,膜對(duì)低分子量的蛋白結(jié)合就越牢固。大于20000的蛋白選用0.45um的膜,小于20000的蛋白選用0.2um的膜。PVDF膜在使用是需預(yù)處理,用甲醇處理的目的是活化膜上的正電基團(tuán),使其更容易與帶負(fù)電的蛋白結(jié)合。PVDF膜具有較高的機(jī)械強(qiáng)度,是印跡法中的理想固相支持物材料。
 
  分類
 
  1、水處理用PVDF膜,分為超濾膜和微濾膜兩種,主要用于污水、海水淡化等的前處理,清除大分子、細(xì)菌、泥沙等雜志
 
  2、戶外建筑用PVDF膜,主要用戶戶外建筑的玻璃、外墻、戶外廣告牌等的保護(hù),主要是耐老化和耐磨功能
 
  3、電池用PVDF膜,包括在燃料電池和鋰離子聚合物電池中的隔膜應(yīng)用
 
  PVDF的主要性能:
 
  · 機(jī)械強(qiáng)度與堅(jiān)韌度高
 
  · 防霉菌性
 
  · 高耐磨性
 
  · 對(duì)氣體和液體的高耐滲透性
 
  · 耐熱穩(wěn)定性好
 
  · 阻燃,低煙
 
  · 溫度提升過(guò)程中抗蠕變性好
 
  · 純度高
 
  · 容易進(jìn)行熔體加工
 
  · 耐對(duì)大多數(shù)化學(xué)品與溶劑
 
  · 兼有剛性的和柔韌的形態(tài)
 
  · 抗紫外線和核輻射性
 
  · 抗沖擊性能
 
  · 耐候性
 
  · 耐低溫達(dá)-40℃

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