應(yīng)用簡介
       用免疫磁珠做細(xì)胞分選(MACS)是高效簡捷的免疫細(xì)胞及其它細(xì)胞的分離純化方法。已包被一抗的磁珠與細(xì)胞表面相應(yīng)分子特異性結(jié)合，或者已包被二抗(羊抗小鼠或羊抗大鼠)的磁珠與預(yù)先已與細(xì)胞表面分子特異結(jié)合的一抗結(jié)合。磁珠攜帶與之結(jié)合的細(xì)胞吸附于分離柱/試管上，實(shí)現(xiàn)陽性細(xì)胞分離或陰性細(xì)胞的分離。
技術(shù)原理
       流式分選：當(dāng)經(jīng)熒光染色或標(biāo)記的單細(xì)胞懸液放入樣品管中，被高壓壓入流動(dòng)室內(nèi)。流動(dòng)室內(nèi)充滿鞘液，在鞘液的包裹和推動(dòng)下，細(xì)胞被排成單列，以一定速度從流動(dòng)室噴口噴出。在流動(dòng)室的噴口上配有一個(gè)超高頻的壓電晶體，充電后振動(dòng)，使噴出的液流斷裂為均勻的液滴，待測(cè)細(xì)胞就分散在這些液滴之中。將這些液滴充以正、負(fù)不同的電荷，當(dāng)液滴流經(jīng)過帶有幾千伏的偏轉(zhuǎn)板時(shí)，在高壓電場(chǎng)的作用下偏轉(zhuǎn)，落入各自的收集容器中，沒有充電的液滴落入中間的廢液容器，從而實(shí)現(xiàn)細(xì)胞的分離。
       磁珠分選：免疫磁珠細(xì)胞分選法是把細(xì)胞用超級(jí)順磁性的(MACS微型磁珠)特異性地標(biāo)記，磁性標(biāo)記完后，把這些細(xì)胞通過一個(gè)放在強(qiáng)而穩(wěn)定磁場(chǎng)中的分選柱。分選柱里的基質(zhì)造成一個(gè)高梯度磁場(chǎng)。被磁性標(biāo)記的細(xì)胞滯留在柱里而未被標(biāo)記的細(xì)胞則流出。當(dāng)分選柱移出磁場(chǎng)后，滯留柱內(nèi)的磁性標(biāo)記細(xì)胞就可以被洗脫出來，這樣就萬全可以獲得標(biāo)記和未標(biāo)記的兩個(gè)細(xì)胞組份。


實(shí)驗(yàn)方法
       本次實(shí)驗(yàn)是用免疫磁珠做細(xì)胞分選(MACS)。實(shí)驗(yàn)流程如下：

技術(shù)總結(jié)
       1、如果分離細(xì)胞用作培養(yǎng)，全過程在超凈臺(tái)中完成。
       2、超微磁珠及微小磁場(chǎng)系統(tǒng)適合于少量細(xì)胞分離(如106-107)，通常已適用于大多數(shù)實(shí)驗(yàn)研究；此外各公司尚有大磁珠及大磁場(chǎng)供應(yīng)，可用于更大量細(xì)胞的分選；除分離柱外，也有試管及其它設(shè)備用于分選；根據(jù)我們應(yīng)用的經(jīng)驗(yàn)，分離柱由于提供了較大的接觸面，在細(xì)胞分選上具有較多優(yōu)點(diǎn)。磁場(chǎng)也可以自制，用一般的磁鐵即可做成簡易磁場(chǎng)，可提供足夠的磁力。
       3、磁珠分離系統(tǒng)分離的細(xì)胞純度可以達(dá)到80~99％，得率在60~90％左右，僅次或相當(dāng)于流式細(xì)胞儀（FACS）的分選效率，與FACS相比，MACS設(shè)備簡單，耗時(shí)極短，故而應(yīng)用廣泛。MACS也可用做FACS分選前的預(yù)分離，以減少FACS所用時(shí)間。另外連續(xù)兩次過柱分選可進(jìn)一步提高分選細(xì)胞純度，通常可達(dá)95－99％。
       4、在分離柱尾接上限速針頭，收集的收次流下的細(xì)胞即為陰性選擇細(xì)胞，一般純度低于陽性選擇。
       5、分離柱一般只能一次應(yīng)用，再用時(shí)降低分離效率；
       6、分選下的細(xì)胞可用熒光標(biāo)記抗體(一抗或二抗)標(biāo)記后FACS鑒定純度；我們用熒光抗體直接標(biāo)記細(xì)胞后，用二抗包被磁珠分選出細(xì)胞，直接做FACS分析，也可實(shí)現(xiàn)分選和純度檢測(cè)。
       7、陽性選擇后，如需用第二種表面標(biāo)志繼續(xù)分離，可以用剪切酶剪切下之結(jié)合的磁珠和一抗，再次進(jìn)行下一輪分選。如需進(jìn)行細(xì)胞功能分析，也可經(jīng)培養(yǎng)12~24小時(shí)，使結(jié)合的磁珠脫落后進(jìn)一步使用陽選的細(xì)胞做研究。