應(yīng)用簡(jiǎn)介
       Co-IP主要用于檢測(cè)蛋白質(zhì)與蛋白質(zhì)之間相互作用，是IP實(shí)驗(yàn)的一種擴(kuò)展，基于IP反應(yīng)的潛力，在樣品溶液中捕獲和純化主要目標(biāo)（抗原等）及通過(guò)天然相互作用與靶標(biāo)結(jié)合的其他的大分子。此外，還可以利用Co-IP來(lái)確定在不同條件下的蛋白質(zhì)相互作用。
技術(shù)原理
       免疫共沉淀是利用抗原和抗體的特異性結(jié)合以及細(xì)菌的ProteinG或A能特異性地結(jié)合到免疫球蛋白的Fc片段的方法。其基本原理是在細(xì)胞裂解液中加入感興趣蛋白的抗體，孵育后再加入與抗體特異結(jié)合的結(jié)合于磁珠的ProteinG或A，若細(xì)胞中存在與興趣蛋白相結(jié)合的目的蛋白，就可以形成蛋白復(fù)合物：“目的蛋白—興趣蛋白—抗興趣蛋白抗體—ProteinG或A”；最后通過(guò)免疫印跡實(shí)驗(yàn)來(lái)檢測(cè)目的蛋白。
實(shí)驗(yàn)方法

技術(shù)總結(jié)
       1、實(shí)驗(yàn)樣品制備方法準(zhǔn)備：很重要！根據(jù)研究目的，檢測(cè)樣品可能是組織樣品，也可能是細(xì)胞樣品，不同樣品制備流程不太相同，目的蛋白表達(dá)量也有較大差別，必須選擇合適的樣品和樣品制備方法；
       2、根據(jù)研究目的選擇適合的蛋白特異性抗體：非常重要！用于Co-IP實(shí)驗(yàn)的抗體是針對(duì)目的蛋白的特異性抗體，理想的是選擇一種能識(shí)別興趣蛋白質(zhì)某個(gè)表位的抗體，且這個(gè)表位不會(huì)被任何其他蛋白質(zhì)相互作用所掩蓋，比普通WB抗體要求高出很多；同時(shí)，抗體特異性和靈敏性盡可能高，才有可能有干凈的背景和較好的IP效果，所以必須選擇適合的抗體用于Co-IP實(shí)驗(yàn)；
       3、細(xì)胞裂解采用溫和的裂解條件，不能破壞細(xì)胞內(nèi)存在的所有蛋白質(zhì)－蛋白質(zhì)相互作用，多采用非離子變性劑（NP-40或Triton-X-100)。每種細(xì)胞的裂解條件是不一樣的，通過(guò)經(jīng)驗(yàn)確定；
       4、不能用高濃度的變性劑（0.2％SDS)，細(xì)胞裂解液中要加各種酶抑制劑；
       5、使用對(duì)照抗體：?jiǎn)慰寺】贵w：正常小鼠的IgG或另一類單抗;兔多克隆抗體：正常兔IgG；
       6、確保共沉淀的蛋白是由所加入的抗體沉淀得到的，而并非外源非特異蛋白，單克隆抗體的使用有助于避免污染的發(fā)生；
       7、要確?？贵w的特異性，即在不表達(dá)抗原的細(xì)胞溶解物中添加抗體后不會(huì)引起共沉淀；
       8、確定蛋白間的相互作用是發(fā)生在細(xì)胞中，而不是由于細(xì)胞的溶解才發(fā)生的，這需要進(jìn)行蛋白質(zhì)的定位來(lái)確定。