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番紅固綠染色科研實(shí)驗(yàn)技術(shù)服務(wù)介紹
番紅固綠染色
番紅-固綠染色
番紅-固綠染色(軟骨)在涉及關(guān)節(jié)軟骨及軟骨下骨的形態(tài)學(xué)研究中，常需聯(lián)合使用多種染料以顯示其組織學(xué)結(jié)構(gòu)。其中，起源于上世紀(jì)60年代的番紅O(safranin O)-固綠(fast green)染色因可以直觀反映關(guān)節(jié)軟骨、軟骨下骨和骨組織的結(jié)構(gòu)而備受青睞。軟骨呈紅色，成骨呈綠色。
技術(shù)原理
番紅-固綠（軟骨）染色法的染色原理在于嗜堿性的軟骨和堿性染料番紅O結(jié)合呈現(xiàn)紅色，嗜酸性的骨和酸性染料固綠結(jié)合而成綠色或者藍(lán)色，與呈現(xiàn)紅色的軟骨對(duì)比鮮明，從而將軟骨組織和骨組織區(qū)分開(kāi)。番紅O是一種結(jié)合多陰離子的陽(yáng)離子染料，其顯示軟骨組織是基于陽(yáng)離子染料與多糖中陰離子基團(tuán)（硫酸軟骨素或硫酸角質(zhì)素）結(jié)合。番紅O著色與陰離子的濃度近似成正比關(guān)系，間接反映基質(zhì)中蛋白多糖的含量和分布。當(dāng)軟骨收到損傷時(shí)，軟骨中的糖蛋白會(huì)釋放出來(lái)，使基質(zhì)成分分布不均勻，從而導(dǎo)致番紅O淡染或不著色。通過(guò)圖像分析軟件可以對(duì)番紅O染色的軟骨基質(zhì)進(jìn)行定量分析。固綠與膠原纖維結(jié)合，不宜褪色。
實(shí)驗(yàn)步驟
<番紅固綠-骨>
1、注意固綠的上色程度，番紅不要掩蓋綠色。
2、切片分化時(shí)間應(yīng)恰當(dāng)，以背景呈綠色為宜。分化過(guò)度容易導(dǎo)致切片不著色，分化不足容易導(dǎo)致切片著色過(guò)深。
送樣運(yùn)輸要求：
1、植物樣本置于20倍樣本體積的FAA固定液中固定24h以上，常溫運(yùn)輸送樣。
2、切勿冷凍結(jié)冰。
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