透射電鏡實驗
一、概述:
透射電鏡(TEM)利用電子束作光源,用電磁場作透鏡,經(jīng)加速和聚集的電子束投射到非常薄的樣品上,形成明暗不同的影像,是綜合物理學(xué)和生物學(xué)相關(guān)領(lǐng)域重要的分析方法。透射電子顯微鏡相比光學(xué)顯微鏡具有較高分辨率,可達(dá)0.2nm,200-200k倍之間連續(xù)可調(diào),用于觀察樣品的內(nèi)部超微精細(xì)結(jié)構(gòu)。
二、實驗應(yīng)用
TEM在細(xì)胞生物學(xué)、病毒學(xué)、病理學(xué)、材料科學(xué)等諸多領(lǐng)域具有廣泛應(yīng)用??梢杂糜谟^測動物植物細(xì)胞超微結(jié)構(gòu),如線粒體、內(nèi)質(zhì)網(wǎng)、高爾基體、溶酶體、葉綠體、液泡及細(xì)胞內(nèi)生細(xì)菌等結(jié)構(gòu)變化。觀測病毒顆粒、外泌體、病原微生物、各類細(xì)菌真菌、納米材料及納米顆粒、晶體結(jié)構(gòu)。
三、實驗示例
四、送樣運輸要求:
①、組織樣本:
1.組織固定,體積盡可能小,一般要求1mm3大小,如果容易漂浮的組織樣本,在管口用棉花塞住保證組織浸泡于2.5%戊二醛中,組織太大固定不充分,容易造成照片模糊或者結(jié)構(gòu)溶解。
2.組織取材要迅速干脆,在幾分鐘內(nèi)保存于戊二醛,保持結(jié)構(gòu)完整性。
3.組織在戊二醛中4℃保存1個月以內(nèi)進(jìn)行實驗,不要存放太長時間。
4.部分組織需要在電鏡時定位,需要加收定位費,常規(guī)組織定位如:腎臟觀察腎小球變化,肺組織觀察特殊的細(xì)胞結(jié)構(gòu),腦組織定位CA1、CA2、CA3結(jié)構(gòu)等。
?、凇⒓?xì)胞樣本:
樣本在收集后一定要肉眼可見方可進(jìn)行實驗,一般要求細(xì)胞量10^6以上。
貼壁細(xì)胞:
棄去培養(yǎng)基,PBS洗滌3次,每孔加入1ml 2.5%戊二醛固定1-1.5h,固定完畢后,細(xì)胞刮輕柔的將細(xì)胞刮下,收集至1.5mL離心管內(nèi),取5ul在顯微鏡下觀察細(xì)胞是否刮碎,如果細(xì)胞完整,則1000rpm離心5min收集細(xì)胞,加入1ml新鮮的2.5%戊二醛重懸置于4度避光保存,一般保存1周進(jìn)行實驗。
懸浮細(xì)胞:細(xì)胞離心收集后,加1ml 2.5%戊二醛混勻固定,4度避光保存。
?、邸⑽⑴?amp;外泌體:
客戶需要將微泡&外泌體分離出來,2.5%戊二醛重懸固定,2.5%戊二醛的量不要太多100uL-200uL即可,保證微泡&外泌體的濃度便于觀察尋找。
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