透射電鏡實驗

　　一、概述：

　　透射電鏡(TEM)利用電子束作光源，用電磁場作透鏡，經(jīng)加速和聚集的電子束投射到非常薄的樣品上，形成明暗不同的影像，是綜合物理學(xué)和生物學(xué)相關(guān)領(lǐng)域重要的分析方法。透射電子顯微鏡相比光學(xué)顯微鏡具有較高分辨率，可達(dá)0.2nm，200-200k倍之間連續(xù)可調(diào)，用于觀察樣品的內(nèi)部超微精細(xì)結(jié)構(gòu)。

二、實驗應(yīng)用

　　TEM在細(xì)胞生物學(xué)、病毒學(xué)、病理學(xué)、材料科學(xué)等諸多領(lǐng)域具有廣泛應(yīng)用?？梢杂糜谟^測動物植物細(xì)胞超微結(jié)構(gòu)，如線粒體、內(nèi)質(zhì)網(wǎng)、高爾基體、溶酶體、葉綠體、液泡及細(xì)胞內(nèi)生細(xì)菌等結(jié)構(gòu)變化。觀測病毒顆粒、外泌體、病原微生物、各類細(xì)菌真菌、納米材料及納米顆粒、晶體結(jié)構(gòu)。

三、實驗示例

四、送樣運輸要求：

　　①、組織樣本：

　　1.組織固定，體積盡可能小，一般要求1mm3大小，如果容易漂浮的組織樣本，在管口用棉花塞住保證組織浸泡于2.5%戊二醛中，組織太大固定不充分，容易造成照片模糊或者結(jié)構(gòu)溶解。

　　2.組織取材要迅速干脆，在幾分鐘內(nèi)保存于戊二醛，保持結(jié)構(gòu)完整性。

　　3.組織在戊二醛中4℃保存1個月以內(nèi)進(jìn)行實驗，不要存放太長時間。

　　4.部分組織需要在電鏡時定位，需要加收定位費，常規(guī)組織定位如：腎臟觀察腎小球變化，肺組織觀察特殊的細(xì)胞結(jié)構(gòu)，腦組織定位CA1、CA2、CA3結(jié)構(gòu)等。

　?、凇⒓?xì)胞樣本：

　　樣本在收集后一定要肉眼可見方可進(jìn)行實驗，一般要求細(xì)胞量10^6以上。

　　貼壁細(xì)胞：

　　棄去培養(yǎng)基，PBS洗滌3次，每孔加入1ml 2.5%戊二醛固定1-1.5h，固定完畢后，細(xì)胞刮輕柔的將細(xì)胞刮下，收集至1.5mL離心管內(nèi)，取5ul在顯微鏡下觀察細(xì)胞是否刮碎，如果細(xì)胞完整，則1000rpm離心5min收集細(xì)胞，加入1ml新鮮的2.5%戊二醛重懸置于4度避光保存，一般保存1周進(jìn)行實驗。

　　懸浮細(xì)胞：細(xì)胞離心收集后，加1ml 2.5%戊二醛混勻固定，4度避光保存。

　?、邸⑽⑴?amp;外泌體：

　　客戶需要將微泡&外泌體分離出來，2.5%戊二醛重懸固定，2.5%戊二醛的量不要太多100uL-200uL即可，保證微泡&外泌體的濃度便于觀察尋找。